动物行为实验指南：大理石掩埋实验方法总结

模型概述

大理石掩埋行为测试是一种流行的抗焦虑药物筛查工具。该测试基于小鼠在自然环境（例如洞穴、逃生隧道）和标准饲养笼垫料中挖掘的倾向，是具有表观效度的动物模型。该测试简单可行，易于在不同的实验室中复制。可以轻松准确地评分，并且对由基因操作、疾病或药物处理引起行为表达的微小变化很敏感。此外，测试是在标准和熟悉的啮齿动物笼子中进行的，笼子里含有与受试者饲养笼中使用的相同垫料，最大限度地减少了小鼠习惯于新的测试环境的需要。而且不需要食物和/或水的限制来“激励”小鼠进行实验。该测试已被证明是药理操作和转基因小鼠模型抗焦虑作用的有效行为测定，可用于转基因小鼠的异常行为表型的高通量筛选，也可以提供对啮齿动物重复和强迫行为的准确和灵敏的测定。

实验程序

（一） 测试前的动物处理

1、根据实验设计，将小鼠单独（可能会增加焦虑）或群体饲养在具有12小时光照/黑暗周期的房间中。小鼠可以自由获得食物和水。在测试前轻轻抚摩小鼠三到五天。雌鼠和雄鼠均可以用于此测试。

2、在上午9：00至下午4：00之间进行行为测试，并在测试开始前60分钟将所有装有小鼠的饲养笼运送到测试室。

（二） 实验前准备

1、在测试室内，将白噪声设置为约60 dB，照度设置为约150 Lux。

2、把实验动物带进测试室，给它们进行分组和编号，然后让它们适应至少1小时。确保在适应的过程中，笼子不要相互堆叠在一起放置。

3、每次准备8到10个笼子，使用标准聚碳酸酯鼠笼（例如，小鼠：26 cm x 48 cm x 20 cm）和安装的过滤器顶部盖进行大理石掩埋测试。

4、将干净、无味的小鼠垫料添加到每个笼子中，深度约为 5 厘米，通过在垫料上再放一个相同大小的笼子将其压平。

5、用温和的实验室清洁剂清洗玻璃弹珠，用蒸馏去离子水彻底冲洗，并在每次使用前晾干。

6、将干净的20个标准玻璃玩具弹珠（各种样式和颜色，直径 15 毫米，约重 5.2 克）轻轻地放在垫料表面，组成一个4 x 5的矩阵（见图1 A）。在一端留下一些空间来放置动物。

7、设置30分钟的计时器。

（三） 开始测试

1、将小鼠放入装有弹珠的笼子的一角，小心将其放在面向弹珠的测试笼的无弹珠区域，并将过滤器顶部盖放在笼子上。测试期间不放置食物和水。

2、计时30分钟，让小鼠在笼子中不受干扰地进行测试。

3、测试完成后，取出小鼠并将其放回饲养笼，在将其从笼子中取出的过程中，要格外小心，不要移动或移开弹珠。

4、及时拍摄笼子中弹珠的最终位置。

5、评分采取盲法，两到三个任务评分员对被测试小鼠的治疗条件或基因型并不知情，计算埋藏的弹珠数量。如果至少弹珠的三分之二表面积被垫料覆盖（也有使用四分之三的标准），则将其标记为埋藏。每个测试对象埋藏的弹珠数量是所有评分者评分的平均值。再将一组数据表示为平均值±标准误，并通过单因素或双因素方差分析与Tukey事后比较进行分析。

6、从垫料中取出所有20个弹珠，处理垫料，清洁笼子。注意把弹珠拿出来的时候，要确保每个笼子里都有20颗弹珠。

补充：

通过稍作修改，该模型可以提供额外的有价值的信息。例如，测试时可以进行录像，并且可以对小鼠的运动活动、行进距离、移动时间以及在测试笼的每个区域（例如中心与四周）花费的时间百分比进行评分。诸如此类的措施可以提供有关焦虑水平的信息，特别是如果使用具有可能引起焦虑的遗传操作的受试者小鼠。药物治疗还可以通过改变运动活动间接改变重复行为，因此该参数的平行测量以及大理石掩埋可以揭示药物诱导的运动影响。

图1.该图显示了使用WT和TPH2 KO小鼠作为实验动物的大理石掩埋测试前后的代表性笼子图像。图A-C从笼子上方拍摄，图D-F从笼子的侧面拍摄。A）放入测试对象之前的典型笼子示例，显示了初始弹珠的整齐排列;B）埋藏后WT小鼠的代表笼子的示例。在此示例中，很少有弹珠被掩埋 （N = 3） 或从其初始位置移位;C）测试TPH2 KO小鼠后的典型笼子示例显示，在这种情况下，20个弹珠中有17个被埋藏。未掩埋的弹珠用箭头表示;D）引入测试小鼠之前的垫料表面侧视图;E）移除WT小鼠后垫料表面变化的示例和 F）测试TPH2 KO 小鼠后的垫料表面示例。图F中的照片无法在二维上完全展示TPH2 KO小鼠对垫料的影响。不仅大多数弹珠被掩埋，垫料表面的“高峰”和“低谷”也证明了TPH2 KO小鼠的挖掘行为。

完整版本的“大理石掩埋实验方法总结”将在印刷版《动物行为实验指南》一书中，敬请期待！

参考文献

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