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同样是沉淀法,为什么师姐提取的外泌体又多又好?

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大概每个做外泌体提取的科研人都踩过沉淀法的坑:

  • 纯度不达标:明明严格按步骤操作,提取物里还是有蛋白、杂质,纯度不达标;

  • 假阳性结构:后续 WB 检测条带模糊、电镜观察背景杂乱,甚至出现假阳性结果;

  • 不同样本不兼容:不同样本(组织、血清、植物等)的杂质类型天差地别,单纯靠通用沉淀试剂,换个样本就翻车,根本没法精准去除杂质……


虽然沉淀法操作简单、成本低、还能快速针对大量样本完成提取,但很多人忽略了沉淀法的核心是通过试剂改变渗透压,让外泌体快速沉降,但这个过程根本没法区分外泌体和蛋白、核酸等杂质,因此单纯的沉淀试剂纯度不会太好。想要获得干净的外泌体,就要从源头减少杂质干扰,针对不同样本类型选对专属试剂盒,宇玫博生物自主开发的外泌体提取纯化试剂盒,适用于组织、细胞上清、血清血浆、乳液、尿液以及其他体液等多种样本,已有七百余篇发表文章支持,点击下方即可申请免费试用,获取外泌体提取解决方案 >>

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那到底该怎么确保外泌体的提取质量,彻底避开这些坑呢?核心就抓两个关键环节,也是宇玫博外泌体提取纯化试剂盒的设计逻辑:

  • 样本处理:初始样本杂质越少,沉淀得到的外泌体自然越干净。而不同样本(组织、血清、植物等)的杂质类型天差地别,所以沉淀法去除杂质的核心在于针对性的样本获取规范 + 专属预处理流程。


  • 后期除菌:除菌和去除大囊泡这两步常常被很多人忽略,这样不仅容易出现污染,还会让大囊泡混入导致假阳性结果,常见的 WB 条带模糊、电镜背景杂乱,往往和这两个因素有关。

不同样本,如何确定处理方案?

1

细胞样本

细胞样本处理的关键在于前期培养,常规培养基含血清蛋白,易与外泌体共沉淀;样本杂质会增加后续提取难度,影响纯度。

因此建议采用外泌体专用培养基。在李一星教授和周磊教授团队共同发表的文章中,团队就采用搭配试剂盒专用化学成分限定培养基(低蛋白含量),所提取的外泌体纯度高、得率稳定,很好的适配了细胞共孵育、组学研究等下游实验[1]。

2

血液样本(血清/血浆)

血清/血浆样本中高丰度杂蛋白、代谢废物多,杂质成分复杂,通用试剂难以精准去除。

通过差异化预处理能够很好的解决这个问题,魏从文教授团队采用 Umibio 血清-血浆外泌体提取纯化试剂盒,高效去除血清杂蛋白,提取的外泌体支撑了结直肠癌肝转移研究,适配蛋白组学分析需求[2]。

3

组织样本(心肌、肝脏等)

这些组织质地致密难破碎,易残留组织碎屑、胞内蛋白等杂质;无菌控制难度高,易出现污染和假阳性。

因此在处理样本时需要先进行组织破碎与杂质分离,协和医院程敏教授团队,用 Umibio 组织外泌体提取试剂盒处理小鼠组织样本,经酶解、专用试剂孵育等步骤去除杂质,提取的外泌体通过 TEM、NTA 鉴定,在心肌纤维化研究中起到了重要作用[3]。

4

植物样本

植物样本细胞壁结构坚固,且富含色素、多糖、多酚及次生代谢物等多种干扰物质,使得囊泡的完整提取与高纯度获取难度加大,而且植物样本种类较多,不同部位的样本提取方法也存在差异。

因此在处理时,针对不同种类的植物样本,有效破解细胞壁并高效去除各类杂质是关键,可以选用 Umibio 植物囊泡提取试剂盒对植物组织进行预处理,不仅针对果实、花/叶、根茎、干品植物(花、根茎、种子)、大型真菌等五大类研发了「专属」试剂盒,更能通过优化的酶解方法与专用纯化试剂相结合,能够温和释放囊泡并深度去除多糖、蛋白等污染物。


除此之外还有细胞上清、尿液等其他样本,宇玫博生物自主开发的外泌体提取纯化试剂盒也都有解决方案。

特别值得一提的是,如果研究涉及到深度蛋白组学、代谢组学分析或者想让电镜下外泌体形态更清晰,还可以采用联用法进行外泌体提取,比如沉淀 + 超离、沉淀 + SEC 等,进一步减少微量杂质对高精度实验的干扰。如果你也有更高的实验要求,点此申请免费试用,把杂质多、得率低等问题交给我们吧!

内容策划:邹礼平

内容审核:吴军

题图来源:图虫创意

参考文献:

[1]. HLF and PPARαaxis regulates metabolic‐associated fatty liver disease through extracellular vesicles derived from the intestinal microbiota. Imeta. 2025 Apr 07;4(2):e70022.

[2]. GP73-dependent regulation of exosome biogenesis promotes colorectal cancer liver metastasis. Molecular Cancer. 2025 May 26;24(1):151.

[3]. Lung-Derived Small Extracellular Vesicles Containing miR-15a-5p/miR-96-5p Promote Myocardial Fibrosis in Hypertrophic Cardiomyopathy via Targeting SMAD7. small. 2025 July 31:e01610.

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