浙江
做 Western Blot 哪有不发疯的，一顿操作猛如虎，一看结果哭成狗。
图源：网络
于是乎，学霸君在网上各处搜罗 WB 秘方，期望能跑出一个完美条带。好巧不巧看到了这样一篇帖子，配字「在最科学的地方做最不科学的事」。
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正当学霸君还在思考东方神的权柄到底能不能管到这西方印记时，贴主已经顺利做出来了……好家伙，终究还是我小瞧了东方神力，建议以后给每个实验室批发一沓符纸！
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当然，考虑到「运气守恒」原则，有时候还是更想把好运留给更有意义的事，比如：刮刮乐中 100w，WB 问题还是先依靠科学的方式来解决。
在此前的一篇推文中，学霸君给大家分享了常见的 6 种异常条带及其修正策略，收获了广泛好评。
漂亮的 WB 条带就像课题组的好男人，都说有但没人见过，被伤害的硕博生绷不住了......
本期内容将继续聚焦异常条带——笑脸、猫咪、牛马、高跟鞋等应有尽有，并为大家带来三种 WB 进阶玩法，一起来学习吧！
一、WB 异常条带
1. 微笑条带——笑笑「蒜」了
微笑条带的特点是两边高，中间低，乍看像一张张微笑。然而，看到这个微笑和收到导师发来的微信自带微笑表情包见效差不多，都能让人心里一凉， 36 小时打水漂罢了。
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可能原因&对策
（1）胶不均匀：凝胶中部凝固不均匀。在配制凝胶时，确保所有试剂充分混合并确保胶完全凝固后进行后续实验，尽量「现用现配」；
（2）电压过高：电压设置过高使得电泳迁移速度过快，可以通过降低电压的方式解决；
（3）电泳温度过高：凝胶过热，建议在冰室或冰水浴中进行电泳。
2.拖尾条带——猫咪统治世界
猫主子无论出现在家里还是刷新在校园的各个角落，路过的时候都让人忍不住想要 RUA 一把。可是，当出现在 WB 条带上时……竟然也还是辣！么！可！爱！
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可能原因&对策
（1）蛋白上样量大：减少每孔的蛋白上样量，常规为 20~30 μg（可根据样本情况进行的动态调整）；
（2）抗体浓度太高 & 孵育时间太长：控制抗体孵育时间，并且按照 protocol 严格执行洗膜步骤（5 分钟*5 次/10 分钟*3 次）。
3.非特异性条带——该有的有，不该有的也有
好消息：看到目标条带了！
坏消息：被杂带包围了……
只能说，做 WB 就像交友「害怕兄弟过得苦，又怕兄弟开路虎」，讲究一个过犹不及。
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可能原因&对策
（1）抗体特异性差：建议更换特异性更高或者更新鲜的一抗或二抗；
（2）封闭不充分：适当延长封闭时间，室温 1~2 h，使用 5% 脱脂奶粉或 BSA 配制封闭液；
（3）洗涤不足：洗膜时间过短或者次数不足，导致膜上残留抗体，需要增加洗膜次数和时间。
4.「艺术」条带——可遇而不可求
以上总结的还是几种相对常见的 WB 问题条带，网友们 PO 在网上的条带更可谓「八仙过海，各显神通」，看看你 PICK 哪一款~
参赛作品 1
名称：失败来得太快就像龙卷风
简介：被魔都结界抵御在外的台风终究是吹上了我的胶，至此 WB 的艺术已大成！
图源：小红书（id：Flavor）
参赛作品 2
名称：像爱不释手的黑色高跟鞋
简介：优雅！太优雅了！
图源：小红书（id：小刘争口气）
参赛作品 3
名称：枯藤老树没有昏鸦
简介：国画大师申请出战，科研界齐白石舍我其谁——
图源：小红书（id：荔汁儿）
参赛作品 4
名称：牛马
简介：跑牛马 WB 享牛马人生
图源：小红书（id：owow）
可能原因&对策
针对上面的几种条带，学霸君的建议是先自行复刻一下，此等神作讲究一个天时地利人和。如果能连续 3 次做出一样的结果欢迎分享在评论区，等待一位 WB 大师为大家解答！
二、WB 邪修大法
近期爆火的做饭综艺「一饭封神」中出现了很多邪修料理，包括但不限于甲鱼冰激凌、菌子提拉米苏……让人不得不感慨厨子们的精神状态。
然而，论邪修这块，我们学术圈更是不遑多让。按照 protocal 跑 WB 多单调，咱们年轻人就是得搞创新！
创新方案 1：自制 27 孔 WB 梳子
你平时跑 WB 都是跑几孔的？10 孔？15 孔？样本少的时候还好说，多起来 15 个孔根本不够用。拆两块板跑，跑到人心力憔悴，永远不知道下次跑出来的是正常款还是艺术限定款。
于是，机智的网友自己 3D 打印了一个 27 孔的梳子，每孔上样 5 ul，轻松解决多样本困境。
审稿人：你文章的创新点在哪里？
答：我 WB 跑的是 27 孔的！
图源：小红书（id：何所幸）
创新方案 2：科研人的浪漫爱心
你是否在担心每周 007 泡在实验室找不到对象？空有一身实验本领却无处彰显？看着隔壁学计算机的哥们都靠着爱心代码成功脱单，自己却毫无动静。
图源：小红书（id：十万个炭治郎）
那么恭喜你！网友提出的这个创新方案可以同时体现科研人的浪漫和专业水平，恋爱脑和慕强批通吃。
STEP 1：配好各种长度的 DNA 去跑琼脂糖凝胶；
STEP 2：假装不经意让你的 crush 帮你看一下胶图，稳稳拿下！
图源：小红书（id：老王的读研日记）
创新方案 3：微信视频远程监督 WB
当 WB 小白还在死死盯着电泳槽，担心跑不动、担心跑歪还担心跑过头，每隔几分钟就去看看跑胶进度，师兄师姐们已经微信视频一开美美回宿舍午睡了。
室友：你怎么天天视频，是不是瞒着我们谈恋爱了！
答：和 WB 暧昧中，勿扰。
图源：小红书（id：刚刚好Re）
WB 作为一个操作复杂、不可控因素多且耗时长的实验，是很多科研人的噩梦，甚至成为了学术造假的重灾区。有些人因为实在跑不出完美条带，索性 PS 一下，5 分钟复制别人半年的努力。
但学霸君认为，科研诚信应该是不可逾越的底线。看看人家
Cell正刊上发布的歪 marker 胶图——
图源：
Cell（Shapir Itai, Yuval et al. Cell, Volume 187, Issue 2, 375 - 389.e18）
不正是说明，好的 WB 结果不强求多么工整无瑕疵，重点在于准确清晰地说明问题。
稍等！那是不是说明上面的部分条带努力一下也能发Cell~
投票：你最喜欢哪个创新方案呢？
题图来源：文章配图 + AI 优化
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