细胞实验室支原体污染该如何预防及解决

细胞实验室支原体污染

-预防及解决-

细胞培养实验室污染是目前普遍存在的问题。在细胞培养等实验过程中，试剂容器表面、环境以及实验人员操作等因素会造成污染，如支原体污染、细菌污染等，可导致细胞功能和性质发生改变，从而影响实验研究的准确性和科学性。支原体属于缺乏细胞壁的原核微生物，直径约0.13～0.18um，大小介于细菌和病毒之间，可透过一般滤膜(0.22um)，因此在细胞培养过程中，细胞极易受到支原体污染。已有许多调查及研究显示，世界范围内正在使用的细胞体系中支原体污染发生率达到30％～60％。

支原体污染的预防

预防是防止细胞培养过程中发生污染的最好办法。预防可从以下几方面着手：

01原材料控制

鸡胚、细胞、胰酶、血清等动物源性原材料均是生物制品的重要生产材料，也是支原体赖以生存的基质，因此，在保证无菌的同时，使用前加强检验可有效阻止支原体污染。

02环境控制

生产车间应定期清洁和消毒，并定期检测，保证环境参数均在可控范围内。生产流程中各个环节的细化，注重人、物、产品以及污物的进出路径，避免交叉污染。生产设备的消毒要彻底，根据生产用具和器械的特性进行相应的高压灭菌或消毒水浸泡，以确保消毒彻底。进入车间洁净区的所有物品均应经表面消毒或紫外照射后方可进入。

03良好的实验室规范

加强对所有人员的生产流程和操作流程的培训，进无菌室前严格按照GMP要求用肥皂洗手，按规定穿无菌服。工作开始要先用75％酒精棉球擦手、擦瓶口和烧灼瓶口。操作者动作要轻，尽量减少走动。

04消毒灭菌的环节

通过消毒灭菌可防止各种污染物和微生物的滋生，要对生物制品生产过程中所用到的各种器具和物品进行消毒灭菌，通过无菌测试后方可使用，从源头上控制污染物的出现。

05合理利用抗生素

抗生素对支原体污染具有一定的抑制作用，所以在生物制品生产过程中应合理利用以预防支原体污染现象的发生。但是支原体对一般抗生素不敏感，并具有一定的抗药性，所以应选择有效的抗生素，在控制好使用剂量的前提下，尽量做到既不不影响细胞的正常功能，又能较好地控制支原体污染。

支原体污染祛除方法

发生支原体污染，目前有研究表明可以采用试剂盒，抗生素方法对细胞培养产物进行祛除。如环境发生支原体污染后须对洁净室进行彻底消毒，包括生物安全柜、空调系统、高效过滤器、培养箱消毒等。目前比较合适的方法是采用35%过氧化氢消毒液的汽化过氧化氢消毒法。该方法是一种广谱灭菌方法，对支原体、病毒、各种细菌、芽孢及真菌等微生物均有良好杀灭作用，对实验室设备安全，消毒完成后产物为水和氧气，不会形成二次残留污染。