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花青素Cy5-生物素,Cy5-Biotin,CY5-生物素的概述

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Cy5-Biotin 概述

Cy5-Biotin,又称花青素Cy5-生物素或Cyanine5-Biotin,是一种结合了近红外荧光染料Cy5和生物素(Biotin)特性的双功能分子探针。它通过化学键(通常为酰胺键)将Cy5与生物素共价连接,兼具Cy5的高荧光性能和生物素的高亲和力识别特性,是化学生物学、荧光成像、免疫检测及分子探针构建等领域的重要工具。


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化学结构与性质

  • 化学结构:Cy5-Biotin属于多甲烯类染料,具有对称吲哚菁骨架,两侧吲哚环通过共轭双键链连接。Cy5与生物素之间通常通过柔性连接臂(如PEG链或烷基链)连接,以减少空间位阻,增强水溶性,并避免荧光淬灭。
  • 光学性能:Cy5是一种近红外荧光染料,其最大吸收波长约为649-650 nm,最大发射波长约为670 nm。它具有高量子产率(约0.2-0.4)和优异的光稳定性,支持长时间成像。近红外特性使其能够穿透较厚的生物组织,减少自发荧光干扰,提供高信噪比的荧光图像。
  • 化学性质:生物素是一种水溶性维生素,具有与链霉亲和素(Streptavidin)或亲和素(Avidin)特异性且极高亲和力的结合能力(解离常数Kd约为10^-15 M)。这种结合能力极强且稳定,不受生理环境影响。

特点

  • 高灵敏度与低背景:Cy5的近红外发射能穿透较厚组织,减少自发荧光,提升检测灵敏度;生物素-链霉亲和素系统可大幅放大信号,适合低丰度目标检测。
  • 强特异性:生物素与链霉亲和素的结合具有极高亲和力和特异性,可避免非特异性结合,实现精准标记。
  • 多功能性:Cy5-Biotin可用于蛋白质定位、核酸检测、细胞表面标记、免疫荧光、流式细胞术、免疫组化等多种应用;亦可用于活体成像,观察肿瘤、血管等深层组织。
  • 良好的光稳定性:Cy5染料光稳定性较高,适合长时间动态观察与实时监测。
  • 易于偶联与使用:Cy5-Biotin试剂通常以固体或溶液形式提供,可溶于DMSO、DMF等有机溶剂,便于与各类生物分子偶联。
  • 多色成像兼容:Cy5的发射波长可与其他荧光染料(如FITC、Cy3)区分,实现多重荧光共定位分析。

储存与使用注意事项

  • 储存条件:Cy5-Biotin应避光、干燥保存,通常建议在-20℃下储存,避免反复冻融。溶液形式可添加BSA或甘油增强稳定性。
  • 使用注意事项:实验需控制pH(7.2-7.5)及温度,防止基团水解或非特异性结合;废弃物应按生物危害处理。

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