HPLC法同时测定采后莲雾果实7 种有机酸的含量

有机酸作为果实风味和营养物质的重要构成因素，影响水果的口感、色泽及生物稳定性，同时还是果品成熟度、耐藏性以及加工性的重要依据。有机酸是莲雾果实中的主要风味物质，其含量与莲雾的风味及品质密切相关，所以对莲雾中有机酸含量的检测具有重要意义。有机酸含量的检测方法较多，主要有酶法、气相色谱法、毛细管电泳法、离子色谱法等。酶法每次只能测定一种有机酸；气相色谱法需要对不易挥发的有机酸进行衍生化反应，过程较繁琐；毛细管电泳法分离度较高，但稳定性较差，准确度不高，精密度不好。高效液相色谱（HPLC）法是当前普遍采用的分析有机酸的方法，该方法具有分离效率高、准确度高和精密度好等优点，因此被越来越多的利用于快速检测领域。

本研究表明，采后莲雾果实絮状绵软和品质劣变进程与呼吸和能量代谢密切相关，分析有机酸的变化是研究呼吸和能量代谢途径变化的重要手段。目前，关于莲雾果实中多种有机酸的HPLC法定量分析鲜见文献报道，集美大学食品与生物工程学院的段云飞、吴光斌*和宁德海关技术中心的叶洪等人采用HPLC法对采后莲雾果实中有机酸的含量同时进行测定，并建立相应的测定方法，以期为采后贮藏过程中莲雾果实的品质变化和生理代谢提供指导。

1 检测波长的选择

分别对7 种有机酸的标准溶液进行紫外扫描，结果表明7 种有机酸在213 nm附近均有较大吸收，故选择213 nm进行实验。

2 流动相梯度的选择

首先采用等度洗脱的方式，结果发现目标成分很难与干扰峰有效分离，出峰时间太晚且拖尾严重。而采用梯度洗脱的方式，则有较大改善，丙酮酸、苹果酸、乙酸和柠檬酸等峰能与干扰峰有效分离，峰形较好。在上述优化条件下，7 种有机酸标准品及莲雾样品的液相色谱图如图1所示，其相邻峰的峰形最佳，分离度较好，可以达到实验要求。

3 流动相及其浓度的选择

分别考察0.01、0.02、0.05 mol/L的NaH2PO4溶液对分离效果的影响。结果表明：当流动相浓度为0.01 mol/L时，丙酮酸和苹果酸、乙酸和柠檬酸分离度均小于1.5，不能很好地分离；当流动相浓度大于0.02 mol/L时，丙酮酸和苹果酸、乙酸和柠檬酸分离效果有较大改善，分离度大于1.5；0.05 mol/L的磷酸盐溶液对分离效果影响不大，并且较高浓度的盐溶液会对泵和柱子的寿命产生影响。综合考虑，选择0.02 mol/L的NaH2PO4溶液进行实验。

4 流动相pH值的选择

有机酸为弱酸，极性较大，流动相中水的比例很高，常发生酸电离。为了使有机酸尽可能以分子形式存在，一般使用酸性流动相抑制有机酸的解离，可通过调节流动相的pH值以达到抑制解离的作用。当pH值从2.2增加到2.4时，各有机酸的保留时间逐渐缩短；pH 2.4时，乙酸和柠檬酸重叠且有明显的前沿峰；pH 2.3时，乙酸和柠檬酸未实现完全分离；pH 2.2时7 种有机酸分离度均大于1.5。有机酸在水溶液中存在一个解离平衡，其大部分以解离形式或结合态形式存在，以分子形式存在的有机酸为少部分，所以较低pH值的流动相可以促进有机酸向分子形式转换，更利于液相色谱的测定。但若pH值太低，大部分有机酸保留时间延长，达不到快速分离效果，且低pH值的流动相对柱子寿命有影响，所以选择pH 2.2进行实验。

5 流速的选择

分别考察不同流速对7 种有机酸分离效果的影响。结果表明，流速较小时，7 种有机酸的保留时间延长，分析时间延长；流速较大时，7 种有机酸的保留时间缩短，分析时间也缩短。当流速为1.0 mL/min时，丙酮酸、苹果酸、乙酸和柠檬酸不能很好地分离；当流速为0.8 mL/min时，乙酸和柠檬酸不能很好分离；当流速为0.5 mL/min时，7 种有机酸可以得到较好分离，故选择流速0.5 mL/min进行实验。

6 柱温的选择

柱温升高可以降低流动相黏度、提高传质效率、缩短分析时间，但柱温太高不利于有机酸的分离且影响色谱柱的使用寿命。本实验中柱温对丙酮酸和草酸的分离效果影响较大，随着柱温升高，丙酮酸和草酸的分离度降低；当柱温为35 ℃时，丙酮酸和草酸重叠，不能分离；当柱温为30 ℃时，丙酮酸和草酸部分重叠，分离度较差；当柱温为25 ℃时，丙酮酸和草酸分离度大于1.5，因此实验中选用温度25 ℃进行实验。

7 标准曲线、线性范围和检出限测定结果

在优化的实验条件下，对不同质量浓度的7 种有机酸标准品进行测定。以各有机酸组分的峰面积为纵坐标（y）、对应质量浓度为横坐标（x）绘制标准曲线，根据信噪比确定检出限（R SN =3）以及定量限（R SN =10）。结果显示，7 种有机酸标准品呈现良好的线性关系，其相关系数范围为0.999 5～0.999 9，检出限为0.001～0.014 mg/g，定量限为0.003～0.042 mg/g。

8 回收率和精密度测定结果

向已知7 种有机酸含量的莲雾样品中分别加入高中低3 个水平的混合标准液，按照3.3节方法处理。每个加标水平平行测定6 次，计算相应组分的加标回收率和相对标准偏差（RSD）。7 种有机酸的平均加标回收率为86.84%～98.86%，RSD均小于5%，说明该方法精密度良好、准确度高。

9 样品测定结果

HPLC法测定莲雾果实中的有机酸含量时，由于各种有机酸的洗脱速度相近，会导致出峰时间间隔小。本研究采用超声辅助加热法，最大限度地提取了莲雾果实中的有机酸。通过对色谱条件的优化，实现了利用HPLC法对莲雾果实贮藏期间丙酮酸、苹果酸、抗坏血酸、乳酸、乙酸、柠檬酸和富马酸7 种有机酸的同时定量测定。结果显示，7 种有机酸含量的RSD均小于5%。

莲雾果实在1 2 d 贮藏期间丙酮酸、乳酸、乙酸、柠檬酸的含量整体呈下降趋势，含量变化范围分别为0.395～0.975、0.030～0.735、0.263～0.702、1.658～5.370 mg/g；苹果酸、抗坏血酸、富马酸的含量变化呈现为先上升后期下降的趋势，但最高值出现的时间略有不同。本实验结果表明，莲雾果实中7 种有机酸含量大小依次为苹果酸＞柠檬酸＞丙酮酸＞乳酸＞乙酸＞富马酸＞抗坏血酸，莲雾果实主要积累的有机酸为苹果酸和柠檬酸。在贮藏期间，苹果酸的含量先上升后下降，柠檬酸含量一直下降，所以贮藏期间，莲雾果实中有机酸含量整体呈下降趋势。有机酸作为果实中主要的风味物质，其含量与果实的品质密切相关，因此在贮藏期间莲雾果实风味变淡，品质逐渐下降。

结 论

本研究采用Atlanis T3色谱柱为固定相，0.02 mol/L NaH2PO4（pH 2.2）和甲醇溶液为流动相进行梯度洗脱，流速为0.5 mL/min，柱温25 ℃，紫外检测器波长213 nm。各有机酸组分的线性范围较宽，相关系数为0.999 5～0.999 9，检出限为0.001～0.014 mg/g，定量限为0.003～0.042 mg/g，RSD低于5%，加标回收率为86.84%～98.86%。该方法准确度高、回收率高，莲雾果实样品无需经过复杂的前处理，即可达到良好的分离效果。

植物果实中的有机酸是决定植物果实风味和品质的重要因素，本实验测定了采后莲雾贮藏期间7 种有机酸的含量变化。结果表明，莲雾果实贮藏12 d期间丙酮酸、乳酸、乙酸、柠檬酸的含量整体呈下降趋势，含量变化范围分别为0.395～0.975、0.030～0.735、0.263～0.702、1.658～5.370 mg/g；苹果酸、抗坏血酸、富马酸的含量变化呈先上升后期下降的趋势，但最高值出现的时间略有不同。本研究建立了HPLC法同时测定采后莲雾果实多种有机酸含量的方法，为进一步深入研究莲雾果实有机酸代谢与品质劣变的关系提供了技术手段，也为其他类水果多种有机酸研究提供参考。

本文《HPLC法同时测定采后莲雾果实7 种有机酸的含量》来源于《食品科学》2021年42卷4期175-180页，作者：段云飞，吴光斌，叶洪，陈昭华，张珅，陈发河。DOI:10.7506/spkx1002-6630-20191025-287。点击下方阅读原文即可查看文章相关信息。

近期研究热点

基于植物广泛靶向代谢组学技术探究小米粥中酚类化合物组成及其抗氧化性
不同蛋白酶对蓝蛤酶解液风味特性的影响

沙葱及其提取物对肉羊体脂4-烷基支链脂肪酸沉积与分布的影响

基于多巴胺及其衍生物的传感器在食品快速检测中的研究进展

羟脯氨酸小肽的体外抗氧化活性

谷物植物化学物中α-葡萄糖苷酶抑制剂的筛选及其分子机制

基于纳米材料的光学适配体传感器在农药残留检测中的应用研究进展

玉米肽的纳滤脱盐工艺及脱盐产物抗氧化活性

【视频讲解】沈阳师范大学粮食学院赵秀红副教授团队：酸汤子面团对发酵面包品质的影响

黄瓜贮藏中微生物信息三维荧光判别及其数量监控模型构建

花色苷改性及应用研究进展

竹叶抗氧化物/酪蛋白酸钠/乳清分离蛋白可食膜的制备和性能分析

沙门氏菌检测生物传感器研究进展

竹叶抗氧化物/酪蛋白酸钠/乳清分离蛋白可食膜的制备和性能分析

水煮藕带贮藏期非酶褐变的主要影响因素探究
咖啡酰奎宁酸类化合物的生物学活性及提高其生物利用度技术研究进展

鳕鱼皮明胶肽硒复合物的制备及结构表征

亚牛磺酸对南美白对虾多酚氧化酶活性及酶构象的影响

高效液相色谱法分析中国人参不同部位中多酚类化合物

间接竞争化学发光酶联免疫分析方法检测禽肉中金刚烷胺和氯霉素残留

【含视频讲解】湖北民族大学汪兴平教授团队：不同处理对糟姜风味成分的影响及风味保真比较

基于UPLC-QTOF-MS技术的压榨和浸出油茶籽油甘油酯组成比较分

低聚果糖对植物乳杆菌A33发酵酸角汁的影响

鸡蛋壳表面典型菌株的分离鉴定及其对全蛋液致腐能力分析

超高效液相色谱-紫外检测法测定婴幼儿配方乳粉中的核苷酸含量

基于DNA条形码技术鉴别有毒鹅膏菌属物种

转录组学解析茉莉酸甲酯对双孢蘑菇个体大小的影响机制

设施调控夜间温度对赤霞珠葡萄果实品质的影响

正相高效液相色谱法同时测定肉制品中4 种羟基十八碳二烯酸异构体的含量

微晶纤维素的醚化改性及其在淀粉膜中的应用

沙棘多糖分离纯化及抗氧化活性

高湿贮藏对青椒果实冷害和抗氧化活性的影响

扩展青霉侵染对苹果果实膜磷脂代谢的影响

减盐对东北农家酱中生物胺形成的影响

苯乳酸和醋酸联用对大肠杆菌的抑菌机理

超声辅助浸渍冷冻对冻藏期间猪肉水饺肉馅水分分布和品质特性的影响

3 种富含多糖面包的体外消化酵解特性

碳酸铵对柑橘酸腐病菌的抑制效果及作用机制

海藻酸钠-纳米纤维素胶粒对乳酸菌胃肠液耐受性的影响

壳寡糖对酒精诱导的大鼠肠道损伤的干预作用

桑叶生物碱对肝纤维化小鼠的改善作用及机制

不同提取方法对牡丹籽油品质的影响

二十二碳六烯酸微藻油乳状液稳定性的影响因素

枣花蜜酚类化合物组成及其抗氧化活性分析

富硒大豆肽的制备及体内吸收性分析

乳酸钙对高酯柑橘果胶乳化性的影响

Brevilaterin微胶囊化技术及缓释特性分析

卵白蛋白-白藜芦醇相互作用机理及其对卵白蛋白的影响

pH值碱性偏移结合热处理对米糠蛋白结构和功能性质的影响

修改/编辑：袁月；责任编辑：张睿梅

图片来源于文章原文及摄图网

为了深度发掘我国农产品的巨大潜在价值，增强农产品在国际国内市场上的竞争力，以市场需求为牵引，开发真正健康安全、环境友好、资源节约、绿色低碳的功能食品，北京食品科学研究院和中国食品杂志社《食品科学》杂志、《Food Science and Human Wellness》杂志将与北京中酿杂志社《中国酿造》杂志、北方民族大学、宁夏大学、国家枸杞工程技术研究中心共同于 2021年5月8-9日 举办“农产品精深加工与功能食品资源开发国际论坛”。

在此，我们诚挚的邀请您出席本次国际论坛，共聚人脉、共享资源、共谋发展！

长按或微信扫码报名