产品名称:Cy7‑UEA‑I,Cy7标记荆豆凝集素I的主流科研应用场景
Cy7标记荆豆凝集素I是将近红外七甲川花菁染料Cy7与从荆豆种子中提取的荆豆凝集素I(UEA-I)共价偶联得到的靶向荧光探针,它既保留了UEA-I对α-L-岩藻糖残基的高度特异性识别能力,又依托Cy7近红外荧光的良好优势,成为糖生物学、血管研究与活体成像领域的核心工具。
核心制备与质控逻辑
Cy7-UEA-I的偶联通常采用NHS酯活化的Cy7染料作为反应前体,在pH 7.2~8.0的弱碱性PBS缓冲体系中,让Cy7的活性基团与UEA-I蛋白表面的伯氨基发生亲核取代反应,形成稳定的酰胺键。反应全程需严格控制投料摩尔比,一般将Cy7染料与UEA-I的投料比控制在6:1~10:1区间,避免标记率过高破坏UEA-I的蛋白空间构象,导致其糖结合活性丧失。
完成偶联后需通过超滤或凝胶层析彻底去除未反应的游离Cy7染料,最终产物需经过双重质控:一是通过紫外分光光度法测定标记率,保证每个UEA-I分子上偶联的Cy7数量控制在2~4的合理区间;二是通过SDS-PAGE电泳验证探针纯度≥95%,同时通过细胞染色预实验确认其靶向结合活性,确保加入游离α-L-岩藻糖后可完全竞争阻断荧光信号。
近红外荧光的良好性能优势
不同于FITC、Cy3等可见光区荧光标记的凝集素探针,Cy7-UEA-I的激发波长约750 nm、发射波长约770 nm,完全处于生物组织的“近红外光学窗口”内。该波段的生物组织自发荧光干扰极低,光散射效应大幅减弱,相比可见光探针可实现数倍的组织穿透深度,在深层组织成像中能获得更高的信噪比。
同时经过磺酸化修饰的Cy7染料赋予探针良好的水溶性,在常规PBS缓冲液中可稳定分散,无需添加有机溶剂助溶,避免了高浓度DMSO等试剂导致的UEA-I蛋白变性失活问题,适配各类活细胞与活体实验体系。
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主流科研应用场景
血管内皮细胞标记是Cy7-UEA-I最核心的应用方向,由于血管内皮细胞表面高表达含α-L-岩藻糖的糖蛋白,该探针可特异性标记活体组织中的微血管网络,广泛用于肿瘤血管生成评估、缺血组织血管新生研究,甚至可实现活体动物的全身血管近红外造影,清晰观测到微米级的微血管结构。
在糖生物学研究中,它可用于检测细胞表面与组织切片中α-L-岩藻糖基化修饰的分布,辅助研究肿瘤发生发展过程中糖链异常修饰的规律;在流式细胞术与流式分选中,Cy7-UEA-I可精准富集表面高表达岩藻糖修饰的特定细胞亚群,为后续细胞功能研究提供可靠的分选工具。
规范储存与操作要点
Cy7-UEA-I需长期置于-20℃避光环境保存,且必须分装使用,严格避免反复冻融,反复冻融会导致Cy7荧光淬灭、UEA-I蛋白聚集失活。实验操作时需现配现用,使用含0.1% BSA的无菌PBS稀释探针,避免使用含叠氮钠的缓冲液,防止叠氮基团抑制UEA-I的糖结合活性,孵育过程全程避光,即可获得稳定可靠的荧光标记结果。
状态:固体/粉末/溶液
保存:冷藏
文章来自西安齐岳生物小编wyh。
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