Phytomedicine (1区，TOP期刊) I 破解 MASLD 脂质堆积困局：长梗冬青苷靶向 HNRNPA1，打通 PPARα 线粒体 β-氧化轴！

2026年1月30日，苏州卫生职业技术学院Yang Zhou、Jingyun Chi等，联合上海交通大学附属第六人民医院南院Kun Zhao、杭州第一人民医院/西湖大学医学院Xizhen Zhou、开拓生命科技（苏州）有限公司等，在Phytomedicine（中科院1区，JCR Q1，Impact Factor=8.3）在线发表题为 “Pedunculoside ameliorates metabolic dysfunction-associated steatotic liver disease by targeting HNRNPA1 and modulating PPARα signaling pathway to enhance Mitochondrial Fatty Acid β-Oxidation” 的研究论文。

代谢功能障碍相关脂肪性肝病（MASLD）是当前最常见的慢性肝病之一，其核心病理特征是肝细胞内脂质异常堆积，并可进一步进展为脂肪性肝炎、纤维化、肝硬化甚至肝癌。目前，MASLD 的治疗仍存在明显不足，除生活方式干预外，真正能够覆盖不同疾病阶段且兼具疗效和安全性的药物仍然有限。因此，寻找新的治疗分子和新的作用靶点，是 MASLD 研究中的重要方向。

本研究聚焦于一种来源于铁冬青树皮的天然三萜皂苷 长梗冬青苷（Pedunculoside，PE）。既往研究提示 PE 具有调节脂质代谢、抗炎、降胆固醇等药理活性，但其是否能够改善 MASLD，以及背后的分子机制尚不清楚。作者围绕这一问题，构建了游离脂肪酸诱导的肝细胞脂质堆积模型，并进一步使用高脂高胆固醇饮食和高脂饮食诱导的 MASLD 小鼠模型，从细胞和动物两个层面系统验证 PE 的治疗作用。

研究发现，PE 能够显著减轻肝细胞内脂滴沉积，降低细胞内总胆固醇和甘油三酯水平；在 MASLD 小鼠中，PE 也能降低体重和肝重，改善肝脏脂肪变性、肝细胞损伤以及血清 ALT、AST、TC、TG 等异常指标。更重要的是，安全性评价显示，PE 未引起明显主要器官毒性，并表现出较好的血液相容性。这说明 PE 不仅具有改善脂质代谢紊乱的潜力，也具备进一步开发为 MASLD 候选治疗药物的基础。

机制层面，本研究的核心发现是：PE 不是简单地直接激活 PPARα 启动子，而是通过直接结合 HNRNPA1，增强 PPARα mRNA 稳定性，从而上调 PPARα 信号通路，促进线粒体脂肪酸 β-氧化。 PPARα 是调控脂肪酸氧化的重要转录因子，其下游包括 CPT2、ACADM、ACADL 等脂肪酸 β-氧化相关关键酶。作者通过转录组、脂质组联合分析发现，PE 处理后 PPAR 信号通路被显著激活，肉碱及相关代谢物升高，甘油三酯和部分游离脂肪酸下降，提示 PE 主要通过促进脂肪酸分解和氧化来缓解肝脏脂质堆积。

为了进一步寻找 PE 的直接靶点，作者综合运用了 CETSA-MS、RNA pull-down-MS、DARTS、CETSA、SPR、分子对接和分子动力学模拟等多种技术。结果显示，HNRNPA1 是 PE 的直接结合蛋白，也是连接 PE 与 PPARα mRNA 稳定性的关键分子。HNRNPA1 作为一种 RNA 结合蛋白，可以结合 PPARα mRNA 并提高其稳定性；PE 与 HNRNPA1 结合后，进一步增强 HNRNPA1 对 PPARα mRNA 的稳定作用，从而提高 PPARα 表达并促进脂肪酸 β-氧化。ScienceDirect 页面也将“HNRNPA1 首次被报道可直接结合并稳定 PPARα mRNA”列为本文亮点之一。

最关键的验证来自 HNRNPA1 敲除模型。研究显示，一旦敲除 HNRNPA1，PE 对 MASLD 的保护作用基本消失：小鼠体重、肝重、血脂指标、肝损伤指标、组织病理改变以及脂肪酸 β-氧化相关酶活性均不能被 PE 有效改善。这一结果说明，HNRNPA1 并不是旁观者，而是 PE 发挥抗 MASLD 作用所必需的核心靶点。换言之，本文建立了一条较完整的作用链条：
PE → HNRNPA1 → PPARα mRNA 稳定性增强 → PPARα 信号激活 → 线粒体脂肪酸 β-氧化增强 → 肝脏脂质堆积减少 → MASLD 缓解。

这项研究的创新性主要体现在三个方面。第一，它将天然产物 PE 与 MASLD 治疗联系起来，证明 PE 在细胞和动物模型中均具有明确的脂质代谢改善作用。第二，它发现了一个此前在 MASLD 治疗机制中未被充分认识的靶点 HNRNPA1，并证明其能够通过稳定 PPARα mRNA 调控脂肪酸 β-氧化。第三，研究并未停留在表型观察，而是通过多组学分析、靶点结合验证和基因敲除模型，形成了从“药效—靶点—机制—体内功能必要性”的完整证据链。

总体而言，本文揭示了 PE 改善 MASLD 的新机制：PE 通过直接靶向 HNRNPA1，稳定 PPARα mRNA，进而增强线粒体脂肪酸 β-氧化，最终减轻肝脏脂质沉积和代谢损伤。该研究不仅提示 PE 可能成为 MASLD 的潜在天然药物候选物，也将 HNRNPA1–PPARα 调控轴提出为代谢性肝病治疗的新机制靶点。作者在结论中也指出，利用天然活性化合物作为分子探针，有助于发现 MASLD 的新型治疗靶点，而 HNRNPA1 正是这一框架下值得进一步关注的候选分子。

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【摘要】

背景：代谢功能障碍相关脂肪性肝病（MASLD）已成为重要的全球健康挑战，迫切需要开发疗效更好、安全性更高的新型治疗药物。长梗冬青苷（Pedunculoside，PE）是一种天然三萜皂苷，已显示出良好的脂质调节作用。然而，PE 在 MASLD 中发挥作用的具体机制仍不明确。

目的：探讨 PE 的抗 MASLD 作用，并阐明其通过靶向异质性核糖核蛋白 A1（HNRNPA1）并调控下游 PPARα 通路发挥作用的新机制。

方法：本研究在原代小鼠肝细胞中，并在高脂高胆固醇饮食（HFHC）和高脂饮食（HFD）诱导的 MASLD 小鼠模型中，评价 PE 的治疗潜力。研究采用多组学和多技术联合策略，包括生化检测、组织病理学分析、转录组和脂质组分析，并通过药物亲和反应靶标稳定性实验（DARTS）、细胞热转变实验（CETSA）、表面等离子体共振（SPR）、分子对接、分子动力学模拟以及 HNRNPA1 敲除模型验证靶标结合关系。

结果：PE 显著改善了 MASLD 模型中的关键代谢异常和组织病理特征。机制上，PE 可直接结合 HNRNPA1，而 HNRNPA1 此前尚未被报道为 MASLD 治疗中的靶点。这种相互作用增强了 PPARα mRNA 的稳定性，从而激活脂肪酸 β-氧化。重要的是，HNRNPA1 敲除会消除 PE 的有益作用，证实 PE–HNRNPA1–PPARα 轴在体内发挥功能所必需。

结论：本研究揭示了 MASLD 中一条新的治疗调控轴：PE 通过直接结合 HNRNPA1 增强 PPARα mRNA 的稳定性，进而上调脂肪酸 β-氧化。该发现不仅表明 PE 是 MASLD 的潜在治疗候选药物，也提示 HNRNPA1–PPARα 调控通路可能成为治疗代谢性肝病的重要机制靶点。

01

研究背景及科学问题

代谢功能障碍相关脂肪性肝病（MASLD）是一组慢性肝脏疾病，其主要特征是肝细胞内脂质过度蓄积，即肝脂肪变性。随着肥胖、2 型糖尿病和代谢综合征流行率不断上升，MASLD 的全球患病率也迅速增加，并已成为全球最常见的慢性肝病。近期流行病学研究估计，全球约 38% 的成年人受到 MASLD 影响，显示出其重要的公共卫生负担。在中国，MASLD 已超过慢性乙型肝炎，成为慢性肝病的首要原因，说明其已经成为重大的国家健康挑战。

临床上，MASLD 可沿着连续病程进展，从单纯脂肪变性，即代谢功能障碍相关脂肪肝（MASL），进一步发展为更严重的阶段，包括代谢功能障碍相关脂肪性肝炎（MASH）、进行性纤维化、肝硬化以及肝细胞癌（HCC）。这种疾病进展风险凸显了早期发现和早期干预的重要性，以降低晚期 MASLD 相关的发病率和死亡率。在这一背景下，Resmetirom 近期成为首个也是目前唯一一个获得 FDA 批准、专门用于成人非肝硬化性 MASH 且伴中重度肝纤维化的药物。然而，其使用仍需与饮食、运动等生活方式干预相结合，并存在胃肠道不适等不良反应风险。对于 MASLD 的其他阶段，治疗选择仍然有限，主要依赖生活方式改变以及降脂药、胰岛素增敏剂和保肝药等间接药物支持，但这些治疗的疗效并不理想。因此，MASLD 管理中仍存在持续的治疗空白，迫切需要开发疗效更好、安全性更高的新型药物。

MASLD 的发病机制本质上与脂肪酸代谢紊乱密切相关，其特点是肝细胞内甘油三酯（TG）过度积累。脂肪酸 β-氧化是关键代谢过程，主要通过两个相互联系的途径进行：线粒体 β-氧化和过氧化物酶体氧化。在这一调控网络中，过氧化物酶体增殖物激活受体 α（PPARα）处于核心地位。PPARα 是一种核受体，是脂肪酸 β-氧化的主要调控因子。作为肝脏富集表达的转录因子，PPARα 通过上调参与脂肪酸分解代谢的关键酶表达，协调脂肪酸氧化代谢，其中包括肉碱棕榈酰转移酶 1A（CPT1A）和酰基辅酶 A 氧化酶 1（ACOX1）。值得注意的是，MASLD 进展与 PPARα 表达显著下调有关，这会导致脂肪酸 β-氧化相关基因在转录水平受到抑制。该代谢紊乱会削弱脂肪酸氧化能力，造成有毒脂质积累，并进一步酯化为甘油三酯，直接推动肝脂肪变性进展。

近年来，天然生物活性化合物及其衍生物作为 MASLD 辅助治疗方式受到广泛关注，可为生活方式干预和常规治疗提供补充获益。由于具有多靶点作用机制、较好的疗效以及良好的安全性，天然生物活性化合物成为缓解 MASLD 的有前景方向。例如，咖啡因可通过恢复肝脏 Dusp9 表达改善代谢相关脂肪性肝炎，灯盏花素则可通过抑制 TGF-β 激活激酶 1 依赖性信号通路减轻 MASH。越来越多证据显示，天然生物活性化合物在 MASLD 治疗中具有潜力，尤其体现在调节脂肪酸 β-氧化及相关代谢通路方面。

九必应，即 Ilicis Rotundae Cortex，来源于铁冬青（Ilex rotunda Thunb.）的树皮，已被《中国药典》正式收载。传统上，九必应因具有抗病毒、抗炎、免疫调节和调节水液代谢等作用，被用于治疗感冒、发热、急慢性肝炎、急性胃肠炎和类风湿性关节炎等疾病。长梗冬青苷（PE）是一种从铁冬青干燥树皮中分离得到的三萜皂苷（C36H58O10），具有多种药理活性，包括抗炎、抗肿瘤、降胆固醇和抗高血压作用。既往研究表明，PE 能显著影响脂质代谢，可调节 PPARγ、C/EBPα 和 SREBP-1 的表达，并在 MDI 诱导的 3T3-L1 细胞中抑制 AMPK 磷酸化。然而，PE 缓解 MASLD 的具体机制仍不清楚。

本研究假设，PE 通过直接作用于异质性核糖核蛋白 A1（HNRNPA1）影响 PPARα mRNA 的稳定性，从而增强脂肪酸 β-氧化，并最终改善 MASLD。我们在细胞模型和动物模型中评估 PE 对 MASLD 的影响，并进一步阐明 PE 对 HNRNPA1–PPARα 轴的调控作用。本研究结果揭示了 PE 在 MASLD 中发挥作用的潜在机制和功能意义，为开发用于治疗 MASLD 的天然药物化合物提供了新的靶点和思路。

02

重要发现及亮点

PE 显著改善原代小鼠肝细胞中的生理表型

本研究首先在 MASLD 样条件下，于原代小鼠肝细胞中评估 PE 的治疗潜力。研究使用游离脂肪酸（FFA）刺激肝细胞以诱导脂质积累，并在有无 FFA 处理的条件下，采用 CCK-8 实验检测 0–400 μM PE 处理后的细胞活力。结果显示，在 0–100 μM 浓度范围内，PE 未表现出细胞毒性。基于这一结果，后续实验选择 50 μM 和 100 μM PE 进行研究。

随后，尼罗红染色分析显示，在 FFA 处理的细胞中，PE 给药后脂质积累呈剂量依赖性下降。此外，50 μM 和 100 μM PE 处理均显著降低了总胆固醇（TC）和甘油三酯（TG）水平。总体来看，这些结果表明，PE 能够有效减轻 FFA 诱导的原代小鼠肝细胞脂质积累。

图 1. PE 对 FFA 处理的原代小鼠肝细胞脂质积累的影响。
（A）PE 的化学结构。（B）采用尼罗红染色评估经或未经 PE 处理的 FFA 诱导原代小鼠肝细胞中的脂滴沉积。（C）尼罗红染色下 FFA 诱导原代小鼠肝细胞脂滴沉积的统计分析。（D–E）PE 对 TC（D）和 TG（E）的影响。数据以均值 ± 标准差表示（n = 3）。*，p < 0.001；**，p < 0.0001。

PE 在小鼠模型中显著缓解 MASLD 相关生理表现

为评估 PE 在 MASLD 中的治疗潜力，研究采用两种饮食诱导的小鼠模型。在 HFHC 模型中，小鼠接受 16 周高脂高胆固醇饮食，并在第 4 周后开始口服 PE（15 mg/kg 或 30 mg/kg），持续 12 周。与 MASLD 模型组相比，两种剂量的 PE 均显著降低体重和肝重，并改善肝脏大体形态。模型组小鼠肝脏的组织学分析，即 H&E 染色和油红 O（ORO）染色，显示明显脂滴积累、肝细胞肿胀和坏死，而 PE 处理后这些改变均得到改善。此外，模型组升高的血清 ALT、AST、TC 和 TG 水平，在 PE 给药后明显下降。

在第二种模型中，小鼠接受 20 周高脂饮食，并同样在第 4 周后开始 PE 处理（15 mg/kg 或 30 mg/kg）。与 HFHC 模型结果一致，PE 显著降低体重和肝重，并改善肝脏形态。组织学结果同样显示，PE 可改善脂质积累和肝细胞损伤，并显著降低血清 ALT、AST、TC 和 TG 水平。

综上，这些结果表明，PE 能够有效减缓小鼠 MASLD 进展，具体表现为降低体重和肝重、改善肝脏组织学改变，并使肝损伤和脂质代谢紊乱相关血清指标趋于正常。

图 2. PE 改善 HFHC 诱导的 MASLD 小鼠肝脂肪变性。
（A）HFHC 诱导的 MASLD 小鼠体内实验流程图。（B–D）NCD、NCD+Vehicle、HFHC、HFHC+Vehicle、HFHC+PE（15 mg/kg）、HFHC+PE（30 mg/kg）和 HFHC+Fenofibrate（10 mg/kg）各组小鼠的体重（B）、肝重（C）和肝脏大体形态（D）。（E–F）上述各组小鼠肝脏切片 H&E 和 ORO 染色代表图及 ORO 染色统计分析。（G–J）上述各组小鼠血清 ALT（G）、AST（H）、TC（I）和 TG（J）水平。数据以均值 ± 标准差表示（n = 6）。****，p < 0.0001；ns，p > 0.05。

PE 具有良好的血液相容性，且未造成严重器官毒性

为进一步评估 PE 治疗的安全性，在动物实验结束后，研究进行了组织病理学检查以及心脏和肾脏功能的生化分析。临床观察显示，NCD、NCD+Vehicle、HFHC、HFHC+Vehicle、HFHC+PE(l)、HFHC+PE(H) 和 HFHC+Fenofibrate 各组之间未见明显差异，HFD 模型中相应各组之间也未见明显差异。此外，对心脏、脾脏、肺和肾脏等关键器官进行组织病理学评估后发现，在 HFHC 和 HFD 两种模型的各组之间均无显著差异。

为进一步研究 PE 可能导致的毒性，研究检测了肾功能和心肌损伤相关生物标志物。结果显示，在两种饮食模型中，各组尿素（UREA）、肌酐（CREA）和乳酸脱氢酶（LDH）水平均无显著差异，提示 PE 未造成主要器官损伤。

此外，研究还进行了溶血实验以评估血液相容性。结果显示，蒸馏水组作为阳性对照，红细胞发生明显裂解，红细胞悬液呈现清晰红色。相比之下，生理盐水组作为阴性对照，与空白血清组、载体血清组、低剂量 PE 血清组和高剂量 PE 血清组在 450–700 nm 吸光度范围内均未观察到差异。这些结果说明，低剂量和高剂量 PE 均具有良好的血液相容性。

PE 通过调控 PPARα 促进脂肪酸 β-氧化

为探究 PE 延缓 MASLD 进展的潜在机制，研究进行了转录组和脂质组分析。RNA 测序结果显示，PE 处理后共有 713 个基因上调、1193 个基因下调。KEGG 和 Wiki 通路富集分析显示，PPAR 信号通路显著激活，其中 PPARα、ACAA1A、FABP1、CPT2、ACADM 和 ACADL 等关键基因出现明显表达变化。

脂质组学分析显示，PE 诱导了广泛的代谢重编程，共有 153 种代谢物上调、190 种代谢物下调。热图分析显示，脂质谱发生明显改变：肉碱及相关代谢物升高，而游离脂肪酸 18:0 和甘油三酯降低。这一变化模式与 SMPDB 通路分析结果一致，后者显示参与长链饱和脂肪酸线粒体 β-氧化的脂质种类显著富集。在差异最显著的代谢物中，VIP 值排名前 20 的代谢物中有 8 个与脂肪酸 β-氧化有关，排名前 50 的代谢物中有 10 个与脂肪酸 β-氧化有关。

整合多组学分析显示，脂肪酸氧化相关基因与肉碱、TC 和 TG 等关键脂质代谢物之间存在显著相关性。值得注意的是，在 PPAR 通路中，PPARα、CPT2、ACADM 和 ACADL 与肉碱及 TG 水平呈现强相关性。

综上，这些结果提示，PE 可能通过增强线粒体脂肪酸 β-氧化来缓解 MASLD 进展。基于转录组和脂质组整合数据，研究认为 PE 主要通过上调 PPAR 通路并促进脂肪酸氧化来调节脂质代谢。

图 3. PE 增强脂肪酸 β-氧化。
（A）转录组测序结果火山图。（B）RNA 测序 KEGG 富集通路图。（C）脂质组学热图。（D）VIP 值最高的前 20 个差异表达脂质柱状图。（E）转录组与脂质组整合分析相关性热图。（F）关键 PPAR 通路基因与脂质组学的整合相关性分析。

β-羟基丁酸（β-OHB）是脂肪酸 β-氧化过程中产生的关键中间代谢物。为评估脂肪酸 β-氧化水平，研究检测了 THLE-2 细胞中的氧耗率（OCR）、β-OHB 水平和 PPARα 表达。PE 处理显著增加 OCR 和 β-OHB 生成。转录组结果显示，PPAR 通路相关基因表达升高，包括 PPARα、CPT2、ACADM 和 ACADL，其中 CPT2、ACADM 和 ACADL 是 β-氧化关键酶，而 PPARα 是主要转录调控因子。与此一致，PE 增强了 PPARα 的 mRNA 和蛋白表达。使用 shRNA 敲低 PPARα 后，PE 诱导的 β-OHB 增加被削弱，证实 PPARα 在其中具有介导作用。

研究进一步通过检测线粒体膜电位（Δψm）、ATP 水平、活性氧（ROS）生成以及 β-氧化酶活性来评估线粒体功能。与 FFA 处理细胞相比，PE 处理以剂量依赖方式升高 Δψm 和 ATP 水平，降低 ROS，并提高 CPT2、ACADM 和 ACADL 活性。在体内实验中也观察到类似结果：在 HFHC 和 HFD 饮食小鼠中，PE 给药增强了 ATP 水平和 β-氧化酶活性。值得注意的是，在 PPARα 敲低细胞中，PE 未能恢复酶活性，进一步支持该过程依赖 PPARα 调控。

总体来看，这些结果表明，PE 通过上调 PPARα 及其下游酶网络，增强线粒体脂肪酸 β-氧化。

图 4. PE 通过调控 PPARα 增强脂肪酸 β-氧化。
（A）对照组和 PE（100 μM）组的 OCR 结果。（B）对照组和 PE（100 μM）组的 β-OHB 水平。（C）THLE-2 细胞中 PPARα 的 mRNA 水平。（D）对照组和 PE（100 μM）组中 PPARα 的 Western blot 及统计分析结果。（E）对照组、PE（100 μM）组、shPPARα 组和 shPPARα+PE（100 μM）组的 β-OHB 水平。（F–H）对照组、FFA 组、FFA+PE（50 μM）组和 FFA+PE（100 μM）组中的线粒体膜电位（Δψm）检测结果（F）、ATP 检测结果（G）和 ROS 检测结果（H）。（I–K）对照组、FFA 组、FFA+PE（50 μM）组和 FFA+PE（100 μM）组 THLE-2 细胞中 CPT2（I）、ACADM（J）和 ACADL（K）的 mRNA 水平。（L–N）对照组、PE（100 μM）组、shPPARα 组和 shPPARα+PE（100 μM）组 THLE-2 细胞中 CPT2（L）、ACADM（M）和 ACADL（N）的 mRNA 水平。（O）示意图显示 PE 通过调控 PPARα 影响 CPT2、ACADM 和 ACADL 的转录水平。数据以均值 ± 标准差表示（n = 3）。，P < 0.05；，P < 0.01；，P < 0.001；****，P < 0.0001；ns，P > 0.05。

HNRNPA1 是 PE 的直接靶点

在观察到 PE 上调 PPARα 蛋白和 mRNA 水平后，研究首先假设 PE 可能增强 PPARα 的转录活性。然而，THLE-2 细胞中的双荧光素酶报告实验显示，PE 对 PPARα 启动子活性无显著影响。由此，研究转而考虑另一种机制，即 PE 可能调节 PPARα mRNA 的稳定性。为验证这一点，研究进行了 mRNA 稳定性实验，以评估 PE 对 PPARα mRNA 降解的影响。结果显示，与对照组相比，PE 处理的 THLE-2 细胞中 PPARα mRNA 在 12 小时内的降解速度显著减慢，提示 PE 可能增强 PPARα mRNA 的稳定性。为进一步探究这种稳定化作用是否源于直接结合，研究采用 SPR 实验检测 PE 与 PPARα RNA 之间的结合亲和力。结果显示，PE 与 PPARα mRNA 之间不存在直接结合。

为鉴定 PE 调控 PPARα 的蛋白靶点，研究对 PE 处理的 THLE-2 细胞进行了 CETSA-MS，同时以 PPARα mRNA 为诱饵进行了 RNA pull-down-MS。Coomassie 染色凝胶条带中的蛋白和 RNA pull-down 洗脱产物均通过 LC-MS 进行分析。在 CETSA-MS 中，在 62℃ 加热、0–90 μM PE 条件下共鉴定出 176 个候选相互作用蛋白；RNA pull-down-MS 则鉴定出 100 个 PPARα mRNA 结合蛋白。两个数据集中唯一共同出现的蛋白是 HNRNPA1。

随后，研究通过多种方法进一步验证 PE–HNRNPA1 相互作用。DARTS 结果显示，PE 能以剂量依赖方式保护 HNRNPA1 免受 pronase 消化。CETSA 结果证实，与 DMSO 对照相比，PE 处理裂解液中 HNRNPA1 的热稳定性增强。分子对接预测显示二者具有较强结合能力，结合自由能为 –8.3 kcal/mol，并与 Val、Glu 和 Tyr 残基形成距离小于 3.5 Å 的氢键。分子动力学模拟显示二者结合稳定，表现为 RMSD 较低且趋于收敛，HNRNPA1 核心结构域 RMSF 降低，回转半径和溶剂可及表面积保持一致，并在整个模拟过程中持续存在 1–2 个氢键。最后，SPR 进一步证实 PE 与 HNRNPA1 之间存在直接且特异性的结合。

总体而言，这些结果证明，PE 可在生化和细胞水平上直接结合 HNRNPA1。

图 5. HNRNPA1 是 PE 的直接结合靶点。
（A）对照组和 PE（100 μM）组的相对荧光素酶活性。（B）对照组和 PE（100 μM）组中 PPARα mRNA 稳定性水平。（C）PE 与 PPARα RNA 结合水平的 SPR 结果。（D）CETSA-MS 与 RNA Pull-down-MS 的整合分析结果。（E）THLE-2 细胞中的 DARTS 结果。（F）THLE-2 细胞中的 CETSA 结果。（G）PE 与 HNRNPA1 的分子对接结果。（H–I）分子动力学模拟中的 RMSD（H）和 RMSF（I）结果。（J）PE 与 HNRNPA1 结合水平的 SPR 结果。***，p < 0.001；ns，p > 0.05。

PE 通过直接结合 HNRNPA1 调控 PPARα

为明确 PE 是否通过 HNRNPA1 调控 PPARα mRNA，研究构建了 HNRNPA1 敲低的 THLE-2 细胞。结果显示，在 shHNRNPA1 组中，PPARα 的 mRNA 和蛋白水平均显著下调。值得注意的是，在 HNRNPA1 敲低后，PE 上调 PPARα 表达的能力被消除。此外，β-OHB 含量检测显示，HNRNPA1 敲低降低 β-OHB 水平，而 PE 对 β-OHB 的调节作用在 HNRNPA1 敲低后同样消失。与 shHNRNPA1 组相比，shHNRNPA1+PE（100 μM）组的 Δψm 和细胞 ATP 水平均显著降低，而 ROS 生成明显减少。机制上，HNRNPA1 的关键作用进一步体现在：在 HNRNPA1 敲低细胞中，PE 介导的三种关键 β-氧化酶 CPT2、ACADM 和 ACADL 的激活完全消失，说明 HNRNPA1 在协调 PE 对脂肪酸代谢的多重作用中处于核心位置。

综上，这些发现表明，PE 通过直接结合 HNRNPA1 调节 PPARα 表达。

图 6. PE 通过直接结合 HNRNPA1 调控 PPARα。
（A）对照组、PE（100 μM）组、shHNRNPA1 组和 shHNRNPA1+PE（100 μM）组中 PPARα 的 mRNA 水平。（B）上述各组中 PPARα 的 Western blot 及统计分析结果。（C）上述各组的 β-OHB 水平。（D–F）上述各组中的线粒体膜电位（Δψm）检测结果（D）、ATP 检测结果（E）和 ROS 检测结果（F）。（G–I）上述各组中 CPT2（G）、ACADM（H）和 ACADL（I）的 mRNA 水平。（J）示意图显示 PE 通过与 HNRNPA1 相互作用影响 PPARα。数据以均值 ± 标准差表示（n = 3）。，p < 0.05；，p < 0.01；，p < 0.001；****，p < 0.0001；ns，p > 0.05。

HNRNPA1 在调控 PPARα mRNA 稳定性中发挥关键作用

为阐明 HNRNPA1 与 PPARα 之间的关系，研究首先在 THLE-2 细胞中调控 HNRNPA1 表达。shHNRNPA1 显著降低 PPARα mRNA 和蛋白水平，而 HNRNPA1 过表达则明显升高二者水平。临床相关性方面，对 206 例 MASLD 患者样本的转录组数据分析显示，HNRNPA1 与 PPARα 表达之间存在强正相关，进一步支持二者之间的功能关系。此外，研究还在体外模型，即不同浓度 FFA 刺激的 THLE-2 细胞，以及体内模型，即 HFHC 饮食诱导的 MASLD 小鼠肝组织中，对 PPARα 和 HNRNPA1 的表达进行相关性分析。结果显示，PPARα 与 HNRNPA1 表达在体外和体内均呈显著正相关。

RNA 结合蛋白（RBP）能够识别特定 mRNA 序列或结构，从而调节 mRNA 的合成、稳定性和功能。鉴于 HNRNPA1 作为 RNA 结合蛋白在 mRNA 稳定性和代谢中的已知作用，研究假设 HNRNPA1 可能在转录后水平调控 PPARα。事实上，PPARα mRNA 稳定性实验显示，敲低 HNRNPA1 会加速 PPARα mRNA 降解，而过表达 HNRNPA1 则会延长其半衰期。RIP 实验证实二者存在直接相互作用，与 IgG 对照相比，Flag-HNRNPA1 pull-down 中 PPARα mRNA 富集更高。RNA pull-down 实验表明，HNRNPA1 更倾向于结合 PPARα mRNA 的正义链，且具体结合区域位于编码序列（CDS）区域。相应地，双荧光素酶报告活性在 HNRNPA1 敲低后下降，在其过表达后增强。

重要的是，PE 处理增强了 HNRNPA1–PPARα mRNA 相互作用，表现为 RIP 实验中 mRNA 富集增加。此外，PE 能增强对照细胞中的荧光素酶活性，但在 HNRNPA1 敲低细胞中不能发挥这一作用。

总体而言，这些结果表明，HNRNPA1 可直接结合并稳定 PPARα mRNA，而 PE 通过增强这种 RNA–蛋白相互作用促进 PPARα 表达。

图 7. HNRNPA1 调控 PPARα mRNA 稳定性。
（A）对照组和 shHNRNPA1 组，或对照组和 OEHNRNPA1 组中 PPARα 的 mRNA 水平。（B）对照组和 shHNRNPA1 组中 PPARα 的 Western blot 及统计分析结果。（C）对照组和 OEHNRNPA1 组中 PPARα 的 Western blot 及统计分析结果。（D–F）GEO 数据库中 MASLD 患者临床样本（D）、人 THLE-2 细胞（E）和 MASLD 小鼠肝脏（F）中 HNRNPA1 与 PPARα 的相关性分析结果。（G–H）对照组和 shHNRNPA1 组（G）或对照组和 OEHNRNPA1 组（H）中 PPARα mRNA 稳定性水平。（I）IgG 组与 Flag-HNRNPA1 组之间的 RIP 结果。（J）反义链和正义链中 HNRNPA1 的 RNA pull-down 结果。（K）CDS 正义链中 HNRNPA1 的 RNA pull-down 结果。（L）对照组和 shHNRNPA1 组，或对照组和 OEHNRNPA1 组中的相对荧光素酶活性。（M）对照组和 PE（100 μM）组中 IgG 与 Flag-HNRNPA1 之间的 RIP 结果。（N）对照组、PE（100 μM）组、shHNRNPA1 组和 shHNRNPA1+PE（100 μM）组的相对荧光素酶活性。数据以均值 ± 标准差表示（n = 3）。，p < 0.01；，p < 0.001；***，p < 0.0001；ns，p > 0.05。

PE 的抗 MASLD 作用依赖 HNRNPA1

基于 HNRNPA1 稳定 PPARα mRNA 的作用，研究假设 HNRNPA1 敲除会破坏这一调控轴并加速 MASLD 进展。为明确 PE 的抗 MASLD 作用是否由 HNRNPA1 介导，研究利用 CRISPR/Cas9 介导删除第 2–8 号外显子，构建了 HNRNPA1 敲除（HNRNPA1KO）小鼠，这些外显子区域涵盖第 1 号外显子的起始密码子和第 10 号外显子的终止密码子。

在第一组实验中，研究通过 16 周 HFHC 饮食在野生型和 HNRNPA1KO 小鼠中诱导 MASLD。在 HNRNPA1KO 小鼠中，PE 干预未能改善 MASLD 表型，包括体重、肝重、血清 ALT、AST、TC 和 TG 水平以及组织病理学特征，即 H&E 和 ORO 染色结果。此外，在 HFHC 模型中，HNRNPA1 缺失消除了 PE 诱导的 ATP 增加和 β-氧化酶 CPT2、ACADM、ACADL 活性增强。

在第二组实验中，小鼠接受 20 周 HFD 饮食。类似地，在 HNRNPA1KO 小鼠中，PE 未能缓解 MASLD 相关指标，表现为体重和肝重无改善，血清生物标志物无改善，组织学改变无改善，ATP 水平以及 β-氧化酶活性也未改善。

综上，这些发现表明，全身性 HNRNPA1 缺失会消除 PE 对 MASLD 的保护作用，说明 HNRNPA1 是 PE 发挥治疗作用的关键介导因子。

图 8. 在 HFHC 诱导的 MASLD 小鼠中，PE 的抗 MASLD 作用依赖 HNRNPA1。
（A）HFHC 诱导的 HNRNPA1KO MASLD 小鼠体内实验流程图。（B–C）WT、WT+PE（30 mg/kg）、HNRNPA1KO 和 HNRNPA1KO+PE（30 mg/kg）各组的体重（B）和肝重（C）。（D）WT、WT+PE（30 mg/kg）、HNRNPA1KO 和 HNRNPA1KO+PE（30 mg/kg）各组肝脏切片 H&E 和 ORO 染色代表图及 ORO 染色统计分析。（E–H）WT、WT+PE（30 mg/kg）、HNRNPA1KO 和 HNRNPA1KO+PE（30 mg/kg）各组血清 ALT（E）、AST（F）、TC（G）和 TG（H）水平。（I–L）WT、WT+PE（30 mg/kg）、HNRNPA1KO 和 HNRNPA1KO+PE（30 mg/kg）各组 ATP 检测结果（I）以及 CPT2（J）、ACADM（K）和 ACADL（L）的 mRNA 水平。数据以均值 ± 标准差表示（n = 6 或 3）。，p < 0.05；，p < 0.01；，p < 0.001；****，p < 0.0001；ns，p > 0.05。

图 9. PE 通过靶向 HNRNPA1 并调控 PPARα 信号通路增强线粒体脂肪酸 β-氧化，从而缓解 MASLD。
PE 通过直接结合 HNRNPA1 稳定 PPARα mRNA，并增强线粒体脂肪酸 β-氧化，从而缓解 MASLD。

【Citation】:Zhou, Y., Chi, J., Xu, X., Zhu, R., Wang, T., Zhang, T., Hong, D., Fu, H., Zhou, X., & Zhao, K. (2026). Pedunculoside ameliorates metabolic dysfunction-associated steatotic liver disease by targeting HNRNPA1 and modulating PPARα signaling pathway to enhance Mitochondrial Fatty Acid β-Oxidation.Phytomedicine : international journal of phytotherapy and phytopharmacology, 153, 157910.

【贡献】★★★★★

本研究证明，PE 可通过直接结合 HNRNPA1 稳定 PPARα mRNA，并增强线粒体脂肪酸 β-氧化，从而缓解 MASLD。这些结果为 PE 在 MASLD 及相关代谢性疾病中的治疗潜力提供了新的机制解释。此外，将天然活性化合物作为分子探针，是发现 MASLD 新型治疗靶点的一种有前景策略；在这一框架下，HNRNPA1 可能成为一个潜在候选靶点。

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