AF488 amine NH2，AF488氨基试剂的主要应用方向

英文名称：AF488-NH2，AF488 amine，AF488-amine，AF488 amine NH2，Alexa Fluor488 NH2，Alexa Fluor488 amine

中文名称：AF488氨基

分子式：C31H32N4O13S2

分子量：732.74

激发波长：495 nm

发射波长：519 nm

消光系数：71800

性状：深橙色固体固体

结构式：

一、基本化学定义与形式区分

AF488-NH₂：指染料分子本身末端带有游离氨基（-NH₂）的化学形式。该氨基可作为后续化学修饰的官能团，通过羧酸活化等步骤，将AF488染料模块共价连接到其他分子上。

AF488-氨基反应性衍生物：通常指AF488染料已预先与活性酯（如N-羟基琥珀酰亚胺酯，NHS ester）等连接子耦联的试剂形式。该形式可直接与靶分子上的伯氨基（-NH₂）在温和条件下发生高效、专一的酰胺化反应，实现共价标记。

二、 主要物理化学与光学特性

吸收与发射光谱：AF488的最大吸收峰位于约495 nm波长处，最大发射峰位于约519 nm波长处。此光谱特性与FITC（异硫氰酸荧光素）类似，可使用配备标准FITC滤光片组的荧光成像系统或流式细胞仪进行检测。

荧光亮度与稳定性：相较于传统荧光素类染料，AF488具有更高的摩尔吸光系数与荧光量子产率，因此能提供更强的荧光信号。其结构中的磺酸基团增强了染料的水溶性，并降低了其对pH环境变化的敏感性，使荧光信号在生理pH范围内更为稳定。

光稳定性：AF488具有较好的抗光漂白能力，适用于需要长时间观察或多次扫描的实验。

三、主要应用方向

生物大分子标记：AF488的氨基反应性衍生物（如NHS酯）是标记蛋白质、抗体、肽段、寡核苷酸等生物分子伯氨基的常用工具。标记后的偶联物可用于追踪目标分子在复杂体系中的位置、分布、丰度及相互作用。

细胞与组织成像：经标记的抗体或特异性配体可用于荧光显微技术，对固定的或透化的细胞、组织切片中的特定靶标进行可视化定位与分析。

流式细胞分析：标记有AF488的抗体广泛用于流式细胞术，通过对细胞表面或内部特定抗原的荧光检测，实现细胞群体的鉴定、分型与功能分析。

生物传感与检测：AF488可作为能量供体或受体，应用于荧光共振能量转移（FRET）体系中，构建用于研究分子构象变化或相互作用的生物传感器。

四、使用、储存与处理注意事项

反应条件：氨基反应性衍生物（如NHS酯）与靶分子的标记反应通常在pH 7.0-9.0的缓冲溶液中进行。应避免含有游离氨基的缓冲成分（如Tris、甘氨酸）的干扰。

储存稳定性：固体粉末形式的试剂应在-20°C或更低温下干燥避光保存。溶解后的溶液应尽可能现配现用，避免反复冻融与水分的引入导致活性酯水解失活。

光敏感性：该化合物对光敏感，所有操作步骤建议在避光或弱光条件下进行。

化学兼容性：标记反应及后续纯化过程需注意避免强还原剂、强亲核试剂或剧烈条件，以防染料降解或连接键断裂。

五、质量控制与验证

为确保实验结果的可重复性，对AF488标记的偶联物进行质量评估是必要的步骤。常见的评估指标包括：

染料-蛋白质摩尔比（D/P值）：通过测量染料在495 nm处的吸光度与蛋白质在280 nm处的吸光度（经染料贡献校正后）进行计算。适宜的D/P值有助于平衡荧光信号强度与标记对生物分子功能的影响。

标记效率与游离染料去除：通常采用凝胶过滤色谱或透析等方法去除未反应的游离染料，并通过相关色谱或电泳技术验证纯化效果。

生物活性保留验证：对于抗体等功能性生物分子，标记后需通过特异性实验验证其结合活性是否得到保持。

以上由WWH编辑提供的试剂信息仅供参考，不作为具体的实验方案、操作步骤或使用承诺。