病理色彩之HE染色

这是达医晓护的第5792篇文章

我说我是搞病理诊断的，你一脸疑惑！

我解释说就是显微镜下看片的，你哦了一声，然后问是不是和看影像胶片一样，黑白灰几个色度来判断疾病？

我说不是，病理的色彩可丰富了，打个比喻：你可以把影像色彩想象成老式黑白电视呈现的画面效果，那病理色彩就是彩色电视机呈现的画面效果，不信给你看几张图片：

怎么样？“五颜六色”用来形容不足为过吧！显微镜下病理色彩可丰富了。

当然不同色彩，需要不同的染色方法。

今天就给大家介绍病理科最常见的染色方法-HE染色。

苏木素-伊红染色（HE染色）是组织学和病理学中最常用的染色方法，其原理基于细胞内不同成分的化学性质与染料的结合。

1. 细胞核染色原理

苏木素的作用

苏木素是一种碱性染料，经媒染剂处理后携带正电荷。细胞核内的染色质主要成分是DNA，DNA双螺旋结构中磷酸基向外，使外侧带负电荷，呈酸性。苏木素的正电荷与DNA的负电荷通过离子键或氢键结合，形成带正电荷的复合物。在碱性环境下，该复合物被氧化为蓝色的苏木红，从而使细胞核染成蓝色。（下图示皮肤、肠黏膜组织）

相关结构染色

除细胞核外，钙盐、软骨、黏液等也因含酸性物质，能与苏木素结合而呈蓝色或紫蓝色。（下图示软骨、病变钙化组织）

2. 细胞质染色原理

伊红的作用

伊红是酸性染料，在水中解离为带负电荷的阴离子。细胞质的主要成分是蛋白质，为两性化合物。当染液pH调至蛋白质等电点（4.7-5.0）以下时，蛋白质带正电荷，可与伊红的负电荷阴离子结合，使细胞质染成红色或粉红色。（下图示肝组织、肌肉组织）

其他成分染色

红细胞、肌肉、结缔组织、嗜伊红颗粒等因含碱性物质，也能被伊红染成不同程度的红色。（下图示小血管内红细胞、骨骼肌组织）

3. 染色过程中的关键步骤

分化作用

染色后用盐酸酒精等分化液处理，去除细胞核和细胞质中过多结合的苏木素，使细胞核与细胞质染色更分明。

返蓝作用

分化后细胞核呈红色，需用弱碱性溶液（如氨水、碳酸锂溶液）使苏木素恢复为蓝色，增强细胞核的染色效果。

通过苏木素染细胞核为蓝色、伊红染细胞质为红色，形成鲜明对比，便于观察细胞和组织的形态结构，是HE染色的核心原理。（下图示乳腺、横纹肌组织）

具体染色步骤如下

1、石蜡切片脱蜡至水，冰冻切片晾干即可；

2、切片入苏木素染色3-5min，水洗，盐酸水溶液分化约3s，自来水洗，氨水返蓝约3s，自来水洗；

3、镜检细胞核呈淡蓝色至蓝色（由不同组织决定），背景淡蓝色或者近乎无色；

4、切片依次入85%和95%乙醇脱水各4分钟，入伊红染液4-5min，三缸无水乙醇脱水，每缸4-5min，正丁醇透明4-5min，两缸二甲苯透明，每缸2-4min；

5、切片转入盛有干净二甲苯的方缸中，中性树胶封片。

结果判读

细胞核呈蓝色，软骨基质、钙盐颗粒深蓝色，粘液灰蓝色，细胞浆呈深浅不同的粉红色至桃红色，胞浆内嗜酸性颗粒呈鲜红色，胶原纤维呈淡粉红色，弹力纤维亮粉红色，红细胞橘红色，蛋白性粘液粉红色。（下图分别示皮肤、胎盘、肠黏膜、血管组织）

当然，时代在进步，病理诊断阅片都用人工智能了，更别说染色了。现在各医院病理科几乎都没有手工染色了吧，取而代之的是全自动染色机，包括染色各个步骤及封片流程，对于大批量的切片染色来说，效率非常高，并且机染颜色质量比手工染更稳定。（图为我科全自动HE染色机）

作者：川北医学院附属医院

病理科 潘盛兰

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