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产品名称:SYTO 62红色荧光核酸染色剂的使用方法
1. 荧光特性
光谱参数:激发波长649-652 nm,发射波长676-680 nm(近红外II区),斯托克斯位移约20-30 nm。量子产率高(>0.3),光稳定性良好,耐光漂白,适合长时间成像。
优势:近红外发射减少生物组织自发荧光干扰,提升信噪比;低光毒性,适合活细胞动态追踪;与蓝光染料(如DAPI)相比,穿透力更强,适用于深层组织成像。
2. 应用场景
细胞成像与检测:
核酸标记:用于荧光显微镜、共聚焦显微镜下的细胞核/线粒体DNA/RNA可视化,如细胞周期分析、凋亡检测。
凋亡检测:与YO-PRO-1联用区分细胞状态:活细胞(SYTO 62亮+/YO-PRO 1−)、早期凋亡(弱+/弱+)、晚期凋亡/坏死(弱+/亮+)。
流式细胞术:细胞周期分析、核酸含量定量、多色共定位(如与FITC、Alexa Fluor 488联用)。
材料与酶活性研究:
标记纤维素表面羧基,量化裂解多糖单加氧酶(LPMO)氧化活性。
检测聚合物微珠(如PMMA)表面羧基化程度,用于材料表面分析。
组织学与细菌检测:组织切片核酸分布标记、细菌核酸染色(需注意游离核酸干扰)。
3. 使用方法
工作液配制:5 mM DMSO母液稀释至工作浓度(通常10 nM-5 μM),避免高浓度导致非特异性结合或背景噪点。
染色流程:
活细胞/固定细胞悬液中加入SYTO 62工作液,避光孵育(室温/4℃,时间依实验调整)。
凋亡检测时,先染SYTO 62,再染7-AAD以区分细胞状态;多色实验需验证光谱重叠,避免串扰。
注意事项:
使用塑料试管(避免玻璃吸附),减少磷酸盐缓冲液以降低背景荧光。
预实验确定最佳浓度,避免浓度过高导致淬灭或非特异性结合。
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