江苏
很多同学在做siRNA转染的时候，常常喜欢通过转染带荧光标记的siRNA如FAM-NC等，再利用荧光显微镜观察转染阳性率来判断siRNA转染试剂的效率或性能高低。其实，这正是一个很大的误区，并且非常容易因为没有专业性的荧光观察指导而做出错误判断。
原因如下：
1.非专业的操作因素干扰：未用PBS/新鲜培养基进行培养板洗涤会导致荧光背景强或细胞表面吸附荧光颗粒，造成假阴性或假阳性的判断；显微镜焦距调节不当或操作不熟练可能观察不到细胞内的荧光点。
2.荧光强度无判断意义：部分转染试剂（如PEI、lipo2000\lipo3000等阳离子脂质体）虽胞内荧光看起来很亮，但这恰恰是发生荧光团聚的现象，并没有有效释放siRNA，导致mRNA敲降效率低，荧光强弱与实际转染效果无关。
3.荧光仅反映转染状态：荧光阳性仅表明siRNA进入细胞，无法反映其能否被有效释放并发挥敲降mRNA的作用，判断转染效果需通过RT-qPCR检测目标基因mRNA的敲降水平为金标准，这才是最科学最准确的判断方式。
真正的siRNA荧光是什么样的呢？我们以RNAiMAX和RFect V2这两款专业的siRNA转染试剂的转染荧光图为例。由于siRNA本身就是小分子片段，因此释放到细胞质中后所呈现出的荧光效果应该是略带折光且分散在细胞质当中的点状荧光。可以参考下图：
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