siRNA转染如何持续性给药？

很多研究者通过siRNA转染实验来进行相关基因功能研究时，常常需要在较长的时间内维持目的基因mRNA的低水平表达，以便于后续可进行加药刺激或添加其它作用物质来探究其相关基因的表达变化与功能。但对于一次siRNA转染实验来说，对目的基因的有效抑制时间通常在72小时以内，之后siRNA的效果会在细胞传代过程中逐渐被降解和稀释，最终消失。那么，如何才能使目的基因持续性的维持较低的mRNA表达水平呢？

有人提出，在72小时后再重新对已转染过的细胞进行siRNA给药，听起来确实是可行的，可事实上并没有如此简单。主要有两方面问题需要考虑，一方面细胞在经历了一次转染后如果出现某些应激反应或损伤，可能会影响再次转染的效果或细胞活力；另一方面就是如何找到一款适合进行多次siRNA给药的转染试剂。以我们实验室多年的转染经验来说，满足多次siRNA给药的转染试剂，细胞毒性一定是首要考虑的方面，毒性低的siRNA转染试剂在进行第一次转染后就应该有能保持细胞生长良好的特性，否则不宜进行二次给药。这里不建议使用lipo2000、lipo3000这类脂质体转染试剂或聚乙烯亚胺类衍生物（PEI）成分的转染试剂，这些转染试剂普遍毒性较大容易造成细胞活力下降甚至较高死亡率，且为了减轻毒性对细胞的影响常伴随着转染前后的换液需求，操作起来也非常繁琐。研究者可以使用专业转染siRNA的转染试剂，像赛默飞的RNAiMAX是专为siRNA转染设计的，虽然也是阳离子脂质体的成分，但相较于lipo3000，细胞毒性已然下降了非常多，就是对于高敏感性的细胞能否使用还是需要考量一下；除此以外，国内也有采用新型可降解生物纳米材料研发的专业siRNA转染试剂--RFect V2，关于该成分目前是受到发明专利保护的，其主要特点是能够将siRNA高效转染进细胞后，自身就会很快代谢降解，对细胞的毒性和影响非常小，转染后细胞的状态和死亡率和正常培养的细胞几乎一致，对于脆弱敏感的原代细胞转染也能达到理想的转染效果，非常适合进行持续性的siRNA给药实验。

针对上述建议，研究者可以根据自身实验需求和经费来选择，经费充足可以选择RNAiMAX；考虑更低的细胞毒性与性价比，可以选择RFect V2。另外还要注意一点，如果siRNA敲降的目的基因是和细胞凋亡或新陈代谢相关的基因，则敲降后细胞自身状态或活力是会受到影响的，这类的基因研究需要慎重考虑能否持续性siRNA给药。