豚鼠半乳糖6酯酶(Gal-6S)ELISA试剂盒

豚鼠半乳糖6酯酶(Gal-6S)ELISA试剂盒

试剂盒性能

1. 特高：由于是抗原的特结合，因此试验的特很高，能够排除其他的。

2. 灵敏度高：由于酶的放大作用，使得试验的灵敏度大大，能够检测出微量的抗原或。

3. 操作简便：ELISA试验操作相对简单，容易，适合于大规模样本检测。

4. 适用范围广：可以用于检测各种抗原、和等生物分子。

样品收集、处理及保存

1. ：使用不含热原和内的试管，操作中避免任何细胞，收集血液后，3000 转离心 10 分钟将和红细胞迅速小心地分离。

2. ：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心 30 分钟取上清。

3. 细胞上清液：3000 转离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。

4. 组织匀浆：将组织加入适量盐水捣碎。3000 转离心 10 分钟取上清。

5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解 冻并确保样品均匀地充分解冻。

自从Engvall和Perlman(1971）报道建立酶联吸附试验（Enzyme-Linked ImmunosorbentAssays,ELISA）以来，由于ELISA具有快速、、简便、易于化等优点，使其迅速的发展和广泛应用。尽管早期的ELISA由于特不够高而妨碍了其在实际中应用的步伐，但随着的不断改进、材料的不断更新，尤其是采用基因工程制备包被抗原，采用针对某一抗原表位的单克隆进行ELISA试验，都大大了ELISA的特，加之电脑化程度的ELISA检测仪的使用，使ELISA更为简便实用和化，从而使其成为广泛应用的检测之一。如今ELISA已被广泛应用于多种和等的诊断。在动物检疫方面，ELISA在猪传染性胃肠炎、牛副结核病、牛传染性鼻气管炎、猪伪、蓝舌病等的诊断中已为广泛采用的。

实验原理

试剂盒采用双一步夹心法酶联吸附试验（ELISA）。往预先包被相关指标的的包被微孔中，依次加入标本、品、HRP标记的检测，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的。颜色的深浅和样品中的相关指标呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

操作步骤

1)涂层:微孔板的孔涂上捕获或抗原。

2)封闭:孔内加入封闭剂(如牛白蛋白或羧纤维素)，非特蛋

白质结合。

3)样本添加:加入含有未知浓度的目标抗原或的样本。

4)洗涤:去除未结合的。

5)检测添加:加入对特定抗原有特的酶标记检测。

6) 再次洗涤:再次去除未结合的检测。

7)底物添加:加入酶的底物，酶作用于底物产生颜色变化。

8)终止反应:加入终止溶液停止酶的反应(在某些类型的ELISA中需要)。

9) 读数:使用光谱光度计测定每个孔的吸光度(通常是在特定波长下)，吸光度

与样本中抗原或的浓度成正比。

点ELISA：与常规的微量板ELISA比较，Dot-ELISA具有简便、节省抗原等优点，而且结果可长期保存；但其也有不足，主要是在结果判定上比较主观，特不够高等。该的主要操作程序为：⑴载体膜的预处理及抗原包被　取纤维素膜用蒸馏水浸泡后，稍加干燥进行压圈。将阴性、阳性抗原及被检测抗原适度稀释后加入圈中，置37℃使纤维素膜干燥。每张7cm×2.3cm的膜一般可点加40－53个样品，每个压圈可加抗原液1－20μl。⑵ 封闭　将纤维素膜置于封闭液中，37℃感作15－30分钟。封闭液多采用含有正常动物、pH7.2或pH7.4的PBS。⑶ 加被检　可直接在抗原圈上加，也可剪下抗原圈、置于微量板孔中，再加入一定量适度稀释的待检，37℃反应一定时间，用洗涤液洗三次，每次1－3分钟。洗涤液一般为一定浓度的PBS-Tween溶液。⑷ 加酶标，37℃反应一定时间后，用洗涤液洗三次。⑸显色　加入新鲜配制的底物液，37℃反应一定时间后，去掉底物液，加蒸馏水洗涤终止反应。⑹ 结果判定　以阳性、阴险作为对照，膜片出现深棕红色点者为阳性反应，否则为阴性反应。

标本的采集及保存

1.：全血标本请于室温放置2小时或4℃过一晚后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2.：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3.细胞物上清或其它生物标本：1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 (注：标本溶血会影响**检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。)

结果分析

根据试剂盒提供的品浓度及对应的OD值，利用品绘制的曲线，计算待测样品的浓度。一般采用拟合曲线法或直线回归法进行数据处理，通过计算待测样品的浓度。

免责声明

试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或生物体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担， 本公司概不负责。

严格按照说明书操作，不同批号不可交换使用，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。

间接ELISA：本法主要用于检测。（DVH）的ELISA为例，间接ELISA的操作程序如下。⑴ 材料① 包被液、洗涤液、保温液、底物液、终止液；② DVH包被抗原、酶标抗、阴性及阳性DVH参考；待检鸭；③ ELISA检测仪、加样器、聚微量板。⑵ 步骤① 加抗原包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干② 加待检 → 37℃ 2小时，洗涤三次、抛干③ 加酶标 → 37℃ 2小时，洗涤三次、抛干④ 加底物液　→ 37℃ 30分钟，加终止液⑤ 用ELISA检测仪测定OD值，并计算出P/N比值。⑶ 结果判定　已知阳性与已知阴性的比值（P/N）≥2.1，而且已知阳性的OD值≥0.4；在上述条件成立的情况下，如果待检与已知阴性的比值（P/N）≥2.1，而且待检的OD值≥0.4，则判为阳性，否则判为阴性。