转染效率低、细胞还死了一半，到底谁能来救救我！

说起实验室的老大难问题，细胞转染必须算一个。作为被导师一直 push 出结果的实验人谁不想一把子拥有转染效率高，细胞活力好，省事又省力的丝滑转染体验。

今天，我们走访了 A 大的细胞重点实验室，收集了大家在转染过程中呼声最高的几个的问题，我们也请教了几位有资深转染经验的师兄师姐，看看他们给大家支的小妙招。（文中含试用福利和惊喜彩蛋哦～）：

问题一：

小 Z

转染后细胞存活率一直很低，在操作上有没有什么技巧能提高存活呢？

可以考虑在转染前提前更换一次预热的 37℃ 培养基。脂质体和 DNA/RNA 的转染混合物建议从培养皿一边到另一边逐滴滴下来。边滴边轻摇培养皿，确保分布均匀。关注下这种小细节，对转染细胞 nice 一点，没准下次转染效率就能提高哦。

师兄

师姐

问题二：

小 W

慢病毒感染后，细胞状态有时会变得不好，这个时候可以从哪些方面考虑原因啊？

首先确定细胞有没有污染，比如细菌污染或者支原体污染；也可以从细胞 MOI 入手，查阅资料看一下转染细胞系的 MOI 值，不同细胞系 MOI 值不同，所需的病毒量也不一样哦，可以摸索条件寻找最适病毒量；还有细胞传代数（细胞传代数不可过多）、尝试增加血清量等方面来改善哦。

师兄

师姐

问题三：

小 Y

最大的困难就是遇到难转染的细胞，比如免疫细胞，原代细胞，干细胞这种，转染效率实在是太低了。

这个时候可以考虑更换选择更好更适合的转染试剂；不过针对这种难转染的细胞问题，还是更推荐使用电转仪，操作方便，一步到位攻克转染老大难问题，让你转染省心又省力～

师兄

师姐

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看，这不来了？隔壁实验室导师就体恤学生转染之苦，新引进了一台 Invitrogen™ Neon™ NxT 电转染系统，分分钟解决各位实验人转染过程中的各种疑难杂症，从此烦恼不在，转染再不是事儿～

Invitrogen™ Neon™ NxT 电转染系统作为新一代电转染平台，它采用创新设计，极大简化了哺乳动物的细胞转染流程。Neon NxT 专有的移液器吸头技术通过最大化两个电极之间的距离，同时最小化其表面积，保证样本具有：

● 更均匀的电场

● 更少的离子形成

● 更小的 pH 变化

● 可忽略不计的发热

从而实现卓越的转染效率和细胞活力。同时操作简单，仅需 3 个步骤：吸样、电转染和分液即可完成。夸太多都不如亲自来试一试，为了让大家都有机会体验，我们推出免费试用活动。

点击「阅读原文」或识别下方二维码，即可申请免费试用。成功完成试用并给出试用反馈，即可获得限量版大号鼠标垫或冰箱贴留言板，礼品数量有限，先到先得。

我们在实验室进行调研时，发现大家还会经常遇到下面这些怎么解决都跨不过的槛儿，一起来看看有没有你也曾为之头大过的：

场景一：小 C 用电转仪转染原代细胞，第二天观察发现，细胞死了一大半，无法进行下游实验

分析原因：传统的比色皿式电转仪，对细胞伤害较大，造成大量细胞死亡。在比色皿中进行电转，电场不均匀，pH 变化大，加上将细胞移进和移出的过程中，细胞多次经受剪切力，导致原本脆弱的细胞更加脆弱，最终导致细胞死亡。

解决方法：对于脆弱细胞，推荐使用温和的电转系统，如 Neon NxT 电转染系统。该系统采用专有的电转染吸头技术，电极间隔较宽，且表面积极小。较小的表面积产生更均匀的电场，并且 pH 值变化极小。转染过程中产生的热量和离子较少，因此细胞生理条件不会受到严重干扰。Neon NxT 省去了将细胞移进和移出比色皿的步骤，减少细胞受到的剪切力。

场景二：小 L 使用电转仪推荐的电转参数，总是达不到理想的转染效率

分析原因：虽然很多电转仪自带针对不同细胞系的实验方案，但是，具体实验条件千变万化，任何微小条件都可能影响实验结果，还需要在此基础上进行参数优化。

解决方法：推荐选择可以灵活调节电转参数的电转仪，快速微调特定参数以优化流程。使用 Neon NxT 电转染系统，可以精确地控制重要的实验参数，无需浪费宝贵的时间去调整不重要的参数。

原代细胞难转染？转染后细胞活力大大下降？好不容易的珍贵样本转染又废了？转染步骤能不能再方便点？遇到这些问题 Neon NxT 电转染系统可以统统解决，分分钟体验科技带来的幸福感~

与累死累活搞转染，最后结果还不好的试剂转染相比，Neon NxT 电转染系统拥有以下令人忍不住心动的优势：

图 1. Invitrogen™ Neon NxT 电转染系统

可靠的性能和极佳的细胞活力

专有的电转染吸头技术，可帮助您自信地转染具有挑战性的细胞系并保持细胞活力。

图 2. Neon NxT 电转染系统的转染效率。在 10 µL 或 100 µL 电转反应中，采用 GFP 质粒 DNA 或 GFP mRNA 转染细胞。转染效率为 GFP 阳性细胞的百分比（n＝3）。注：初始T细胞仅在 100 µL 反应中进行电转。

图 3. Neon NxT 系统电转染后的细胞活率。在 10 µL 或 100 µL 电转反应中，采用 GFP 质粒 DNA 或 GFP mRNA 转染细胞。用 Invitrogen™ SYTOX™ 红色死细胞染色剂对转染细胞进行染色，并在 Invitrogen™ Attune™ NxT 流式细胞仪上评估细胞活率。细胞活率（%）以 3 次测量的平均值报告。注：初始 T 细胞仅 在 100 µL 反应中进行电转。

节省珍贵的样本

Neon NxT 电转染系统的电转染过程发生在移液器吸头内，而非比色皿内，最大程度地减少样本损失和细胞承受的剪切力。

节省研究时间

Neon NxT 系统仅需 3 个简单的步骤：吸样、电转染和分液。孔板设置模式可设置不同参数条件，20 分钟内可对 24 份样本进行电转染。

灵活易用

采用 Neon NxT 电转染系统，可以精确地控制重要的实验参数，无需浪费宝贵的时间去调整不重要的参数。

使用 Thermo Fisher Connect 上基于云平台的 Invitrogen ™ TransfectionLab ™ 应用程序优化电转参数，提高生产率和可追溯性。在输入详细实验信息后，将会生成从设计阶段开始为您的实验量身定制的分步指南。

互动福利

留言分享你在转染中遇到的问题或趣事，截止 2023 年 4 月 6 日 17:00，点赞数量前 20 名，即可获得限量版转染徽章，快来参加吧，预祝大家实验顺利。

内容策划：潘成
内容审核：吴军

图片来源：赛默飞

题图来源：图虫创意