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一文读懂 siRNA、shRNA、miRNA

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简单来说, miRNA 与 siRNA 和 shRNA 都有着密切的关联,不过介绍他们之前我们需要先了解下 RNA 干扰(RNAi)技术。

RNA 干涉 (RNAinterference,RNAi) 是有效抑制目标基因表达的过程,指内源性或外源性双链 RNA(dsRNA)介导的细胞内 mRNA 发生特异性降解,从而导致靶基因的表达沉默,产生相应的功能表型缺失的现象。

如果还对细节感兴趣可以直接参考这篇更为细致的视频讲解


而在 RNAi 途径的基因沉默中具有实质利害关系的是 siRNA 和 shRNA。虽然他们两个都可用于蛋白沉默,但它们的作用机制有所不同。

1. siRNAs 是短的 RNA 双链,在 3‘ 端有两个碱基的游离。

2. shRNA 由正义链和反义链通过环状序列(loop)隔开共同组成。

3. shRNA 构建用于插入表达载体(如慢病毒载体)。

同时,SiRNA 可参与的实验也不胜枚举

而通过与 miRNA 的加工相同的 RNAi 机制, shRNA 被加工成 siRNA。

miRNA 与 siRNA 之间有许多相同之处:

1.二者的长度都约在 22nt 左右。

2.二者都依赖 Dicer 酶的加工,是 Dicer 的产物,所以具有 Dicer 产物的特点。

3.二者生成都需要 Argonaute 家族蛋白存在。

4.二者都是 RISC 组分,所以其功能界限变得不清晰,如二者在介导沉默机制上有重叠。

5. miRNA 和 siRNA 合成都是由双链的 RNA 或 RNA 前体形成的。

而 miRNA 与 siRNA 的不同点

1.根本区别是 miRNA 是内源的,是生物体的固有因素;而 siRNA 是人工体外合成的,通过转染进入人体内,是 RNA 干涉的中间产物。

2.结构上,miRNA 是单链 RNA ,而 siRNA 是双链 RNA。

3.Dicer 酶对二者的加工过程不同,miRNA 是不对称加工,miRNA 仅是剪切 pre-miRNA 的一个侧臂,其他部分降解;而 siRNA 对称地来源于双链RNA的前体的两侧臂。

4.在作用位置上,miRNA 主要作用于靶标基因 3′-UTR 区,而 siRNA 可作用于 mRNA 的任何部位。

更多 miRNA 实验方法干货:

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