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图1:转染了5 nM标记的野生型EGFR的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞EGF-Alexafluor488。添加了TetraSpeck fiducial markers并在低温下成像。
背景
贝特曼先生是一名链路科学家,在中央激光设施(CLF)与林王博士合作。该设施拥有从房间大小的激光器到紧凑型台式激光器的各种设备。贝特曼先生利用激光器配合显微镜为学术界进行荧光成像,这些研究人员通过竞标获得CLF的使用时间。贝特曼先生及CLF的其他人员需要不断跟进最新的成像技术,以最好地满足各种成像需求。
CLF服务于许多不同的应用,包括超分辨率技术,如用于极高分辨率成像的随机光学重建显微术(STORM)。在极低成像光子预算的情况下,STORM重建需要能够进行光子计数的探测器,尤其是在低温条件下。
挑战
这些CLF STORM成像系统此前使用的是EMCCD技术,但正如Bateman博士所概述的那样,这些技术在动态范围方面遇到了问题:“我们观察的是液氮蒸汽中的样本,它们会发生弹跳和晃动,为了修正这一点,我们使用明亮的TetraSpeck珠子作为基准标记,这些珠子比我们测量的样本亮得多,而EMCCD的满阱深度不足以捕捉所有的荧光信号,我们需要一种对珠子和STORM信息具有更大动态范围的设备。”
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贝特曼先生还提到,更大的像素尺寸将有助于提高灵敏度,“我们确实尝试过使用6.5微米像素的传统CMOS,但采样率与我们选择的显微镜物镜和固体浸没透镜组合不匹配,导致总放大倍数高达450倍。为了回答用户群体正在研究的生物学问题,我们需要尽可能获得最佳的STORM测量精度。这只有通过正确采样的荧光点扩散函数和高探测器量子效率才能实现。Prime 95B同时满足了这两个要求,目前正支持我们所有低温用户群体的实验。”
我们喜欢95%的量子效率、11微米的像素尺寸以及速度优势,对于我们的低温应用而言,确实没有理由再使用EMCCD了。Benji Bateman先生,Lin Wang博士
解决方案
Prime 95B CMOS 满足了超分辨率成像系统的需求,在动态范围、速度、视场和分辨率方面优于以往的 EMCCD 解决方案,同时通过最大化信号收集和最小化噪声,保持了高灵敏度。
贝特曼先生谈到了Prime 95B的优势:“我们非常看重其95%的量子效率、11微米的像素尺寸以及速度优势,这些对我们来说都是极大的利好,我们真的没有理由再使用EMCCD了……[Prime 95B]的另一个加分项是其更广的视野和更多的像素,尤其是与芯片尺寸非常小的EMCCD相比……我们将两台95B耦合到了Cairn TwinCam中,每个通道都充分利用了完整的芯片尺寸。”
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