AF350 NHS，200554-19-4用于免疫荧光染色和流式细胞分析等

一、试剂信息
中文名：AF350琥珀酰亚胺酯，AF350活性酯
英文名：Alexa Fluor 350 NHS，AF350 NHS，Alexa Fluor 350 N-Hydroxysuccinimide Ester，AF350 N-Hydroxysuccinimide Ester
CAS号：200554-19-4
二、试剂规格
分子式：C16H14N2O9S
分子量：410.35
激发波长：346 nm
发射波长：445 nm
消光系数：19,000 cm-1M-1
光谱类似染料：Marina 蓝色
规格：5mg，10mg，25mg
纯度：≥95%

三、物理与化学性质
溶解性：溶于水或部分有机溶剂
稳定性：稳定性较好，但需注意避免频繁解冻，保持干燥、避光。
四、标记原理与应用
NHS酯通过与蛋白质、抗体或胺修饰的寡核苷酸等分子表面的伯胺（主要来自赖氨酸侧链） 发生反应，形成稳定的酰胺键，同时释放N-羟基琥珀酰亚胺。
1.标记对象：蛋白质、抗体、多肽以及任何含有伯胺的分子。
2.主要应用：广泛应用于免疫荧光染色、流式细胞分析、荧光显微成像以及多色标记实验等多种研究领域。
五、主要优势
高亮度与光稳定性：与传统蓝色荧光染料相比，Alexa Fluor 350偶联物通常表现出更亮的荧光和更高的光稳定性。
pH不敏感：在pH 4至10的范围内具有良好的荧光稳定性，使其适用于多种实验环境。
水溶性：染料本身具有良好的水溶性，便于在生物缓冲体系中进行反应。
六、标记实验指南
以下是为IgG抗体进行标记的典型方案，你可以根据实际需求对反应规模进行缩放。
1.准备蛋白溶液
将待标记的蛋白（如抗体）溶解在pH 8.3的0.1–0.2 M碳酸氢钠缓冲液中。
为确保标记效率，蛋白浓度建议不低于2 mg/mL。
2.配制染料储存液
将Alexa Fluor 350 NHS酯粉末溶于高质量的无水DMSO或DMF中，配制成高浓度的储存液。
3.进行偶联反应
将适量染料储存液加入到蛋白溶液中，在室温下避光反应1小时。
为获得最佳标记效果，建议通过预实验优化染料与蛋白的投料摩尔比。
七、偶联物纯化
反应完成后，需要使用凝胶过滤柱或透析的方法，将标记好的蛋白与未反应的游离染料分离开来。
也有专门的抗体偶联物纯化试剂盒，可以根据标记的蛋白量选择不同规格的，方便快捷。
八、相关试剂
Alexa Fluor 405 NHS Ester
Alexa Fluor 488 NHS Ester
Alexa Fluor 555 NHS Ester
Alexa Fluor 594 NHS Ester
Alexa Fluor 647 NHS Ester
Alexa Fluor 680 NHS Ester
Alexa Fluor 750 NHS Ester
Alexa Fluor 350 Maleimide
Alexa Fluor 350 Hydrazide
Alexa Fluor 350 Streptavidin
AF350 streptavidin conjugate
AF350 C5 Maleimide，AlexaFluor350 C5 Mal
AF350 NHS Ester，AlexaFluor350 SE
200554-19-4
Alexa Fluor 350 Concanavalin A
Alexa Fluor Plus 750 Phalloidin；Alexa Fluor Plus 750 鬼笔环肽
Streptavidin, Alexa Fluor700 conjugate；Alexa Fluor700 链霉亲和素偶联物
Alexa Fluor 647 Concanavalin A
Annexin V Alexa Fluor 488；Annexin V AF680
AF514 NHS ester，Alexa Fluor514 SE

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