本文对壳聚糖和芦荟提取物组合物(简称为壳聚糖组合物)的体外护龈效果进行研究,包括凝血效果、抑菌效果和口腔抗炎效果等。实验结果表明,壳聚糖组合物具有优良的凝血能力、口腔抑菌能力和口腔抗炎能力,可以通过缓解牙龈出血、减少口腔细菌和缓解牙龈炎症等方面达到护龈效果,在口腔护理应用中有较好的使用前景。
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研究亮点速览
①快速凝血能力:壳聚糖组合物在即时(1min)具有较优的凝血效果;
②高效抑菌作用:壳聚糖组合物漱口水对两种关键口腔致病菌变异链球菌和金黄色葡萄球菌的抑制率分别高达95.65% 和99.86%,能够有效抑制有害菌群;
③显著抗炎功效:壳聚糖组合物可以显著降低人牙龈成纤维细胞中的炎症因子IL-1α、IL-6和TNF-α的含量,从而达到降低牙龈炎症的作用;
④人体试验验证:100%志愿者认为使用7天壳聚糖组合物牙膏后牙龈问题得到了改善,牙龈问题评分降低率为50.22%。
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01
实验部分
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主要试剂
①3.2%柠檬酸钠真空采血管,山东威高;
②变异链球菌(ATCC25175);
③金黄色葡萄球菌(BNCC186335);
④磷酸盐缓冲液(PBS),博士德;
⑤胎牛血清(Procell,164210-50);
⑥人牙龈成纤维细胞完全培养基(CM-H240),普诺赛;
⑦胰酶(BL512A),Biosharp;
⑧人白介素1α(IL-1α)酶联免疫吸附测定试剂盒(E-EL-H0088c),Elabscience;
⑨人白介素6(IL-6)酶联免疫吸附测定试剂盒(E-EL-H6156),Elabscience;
⑩人肿瘤坏死因子α(TNF-α)酶联免疫吸附测定试剂盒(E-EL-H0109c),Elabscience;
⑪凝血酸,广州思可希生物科技有限公司;
⑫壳聚糖(脱乙酰度≥90%),浙江金壳药业股份有限公司;
⑬芦荟提取物,云南万绿生物股份有限公司。
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主要仪器
①恒温孵育箱(ZRD-A5210),上海智诚;
②Varioskan Flash多功能酶标仪,Thermo Scientific;
③低速离心机(TD5),上海卢湘仪离心机仪器有限公司;
④高速离心机(5418),Eppendorf;
⑤高温高压灭菌锅,上海尚仪;
⑥生化培养箱(LRH-250),上海恒一;
⑦超净工作台(SW-CJ-2FD),苏州净化;
⑧厌氧培养箱,日本三菱;
⑨CO2恒温培养箱(WIGGENS WCI-180),北京桑翌实验仪器研究所。
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壳聚糖组合物、漱口水和牙膏的制备
壳聚糖组合物中壳聚糖和芦荟提取物的含量分别为0.1%和2%;采用常见漱口水和牙膏制备工艺,对壳聚糖组合物进行漱口水和牙膏样品制备。其中,漱口水中壳聚糖和芦荟提取物的含量分别为0.001%和2%;牙膏中壳聚糖和芦荟提取物的含量分别为0.1%和2%。
02
实验结果与讨论
1
口腔原料的凝血效果验证
由图可知,凝血酸(0.1%)、壳聚糖(0.1%)、芦荟提取物(2%)和壳聚糖组合物均具有较好的凝血效果,而且壳聚糖(0.1%)、芦荟提取物(2%)和壳聚糖组合物的凝血效果在1~10 min内均比凝血酸(0.1%)强。
其中,芦荟提取物(2%)在长程(10min)的凝血作用较优,壳聚糖(0.1%)在中短程时间(3和5min)的凝血作用较优,壳聚糖组合物在即时(1min)凝血的效果较优。壳聚糖和壳聚糖组合物较优的凝血时间与牙膏(3~5 min)和漱口水(1min)的使用时间较接近,因此应用在口腔产品中可以在短时间内实现口腔止血效果。
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2
壳聚糖组合物口腔产品功效验证
⑴抑菌效果
如图3所示,壳聚糖组合物漱口水对变异链球菌的抑制率达到95.65%,对金黄色葡萄球菌的抑制率达到99.86%。因此,壳聚糖组合物漱口水对变异链球菌和金黄色葡萄球菌具有较高的抑制作用,应用在口腔护理领域可以抑制有害菌群生长,促进口腔健康。
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⑵口腔抗炎效果
如图4所示,与LPS组相比,壳聚糖组合物牙膏(0.05%)和壳聚糖组合物漱口水(0.25%)的IL-1α含量显著下降,下降率为64.99%(P<0.01)和65.15%(P<0.01)。
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从图5可以看出,与LPS组相比,壳聚糖组合物牙膏(0.05%)和壳聚糖组合物漱口水(0.25%)的IL-6含量均有下降,下降率为13.63%(P<0.05)和11.06%(P<0.05)。
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从图6可以看出,壳聚糖牙膏(0.05%)和壳聚糖漱口水(0.25%)的TNF-α含量均有下降,下降率为80.05%(P<0.01)和43.80%(P<0.05)。
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因此,通过体外抗炎实验可知,壳聚糖组合物牙膏和壳聚糖组合物漱口水均可以显著降低人牙龈成纤维细胞中的炎症因子IL-1α、IL-6和TNF-α的含量,从而达到降低牙龈炎症的作用。
⑶人体护龈效果
对壳聚糖组合物牙膏进行了小规模的志愿者测试。根据志愿者的问卷调查反馈,使用提供的壳聚糖组合物牙膏后,有100%的志愿者认为自己的牙龈问题得到了改善;有70%的志愿者认为该壳聚糖组合物牙膏比自己之前使用的护龈牙膏效果更好。
如图7所示,志愿者使用壳聚糖组合物牙膏前的牙龈问题评分为5.70分,使用后评分降低为3.65分,牙龈问题评分降低率为50.22%,说明本研究的壳聚糖组合物牙膏具有较优的改善牙龈问题的效果。
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04
结论
综上,壳聚糖组合物具有优良的凝血能力、口腔抑菌能力、口腔抗炎能力,可以通过缓解牙龈出血、减少口腔细菌和缓解牙龈炎症等方面达到护龈效果,具有良好的口腔产品护龈功效前景。
来源:转载自《日用化学品科学》2025年7月第48卷第7期 P23-P28
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