一、化学结构与功能特性
Alexa Fluor 750 C5马来酰亚胺是一种以菁染料Alexa Fluor 750为核心的荧光标记试剂,其分子结构包含一个五碳间隔臂(C5 linker)连接的马来酰亚胺官能团。马来酰亚胺基团具有高度反应活性,能够与蛋白质或其他生物分子中的巯基(-SH)发生特异性迈克尔加成反应,形成稳定的硫醚键。这种化学选择性使其成为标记含半胱氨酸残基分子的理想工具。C5间隔臂的设计平衡了空间位阻与反应效率,在避免分子拥挤的同时确保标记位点可及性。染料母体Alexa Fluor 750属于近红外荧光团,其发射波长位于750纳米附近,这一特性使其在复杂生物样本(如组织切片或多重检测体系)中具备较低的背景干扰潜力。
二、应用场景与操作适配性
该试剂在生物标记实验中展现出较强的流程兼容性。例如,在抗体偶联实验中,研究人员可通过控制反应体系的pH值(通常为6.5-7.5)和温度(室温至37℃)优化巯基修饰效率。五碳间隔臂的存在减少了标记后可能发生的空间位阻效应,尤其适用于需要维持目标分子天然构象的实验场景。值得注意的是,马来酰亚胺基团对氧气和水分敏感,需在惰性气体保护下储存,并在新鲜配制的缓冲液中溶解使用。此外,该试剂的溶解性经过优化,可溶于有机溶剂(如DMF或DMSO),便于在低水相体系中实现高浓度预处理,再通过稀释完成生物分子标记。这种两步操作模式有助于提升反应均一性。
三、光谱特性与检测优化视角
Alexa Fluor 750的激发波长约为749纳米,发射峰值约775纳米,属于近红外II区范围。这一光谱位置使其能够利用传统流式细胞仪或共聚焦显微镜的近红外通道进行检测,同时与其他常见荧光团(如FITC、Cy5等)实现多色复用。由于近红外光在生物组织中的穿透深度较高且自发荧光较弱,该试剂在深层组织成像或高背景样本(如血管造影)中可能表现出信号稳定性优势。实验设计时需注意激光器配置与滤光片匹配——建议使用配备750±10纳米带通滤光片的检测系统以较大化信噪比。此外,染料的光漂白速率受环境pH值和淬灭剂浓度影响,可通过添加抗光漂白剂(如Trolox)进一步优化成像时长。
产地:西安瑞禧生物
用途:科研
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