《食品科学》：黄花倒水莲总皂苷抗凝血和抗血栓作用及机制：基于网络药理学

黄花倒水莲（Polygala fallax Hemsl，PFH）为远志科远志属黄花倒水莲的干燥根，在湖南省内资源丰富，具有补益气血、健脾利湿、活血调经等功能，可用于急性慢性肝炎、跌打损伤、腰膝酸软、病后体弱等疾病的治疗，还具有一定的抗衰老作用，为少数民族瑶族的常用药物，是南方传统的药食同源植物，民间常用其根部来炖煮肉类进行食疗。

PFH为少数民族特色药材，其价值没有获得充分的开发与利用，且已有初步研究表明PFH水煎液具有抗凝血效果，但未作深入探讨，湖南师范大学医学院的刘育铖、毛思宇、冯 星*等人通过对PFH的化学成分、抗凝血作用及其机制的研究，为后续研究开发新型的抗凝血、抗血栓药物奠定基础。

1、PTS中皂苷A质量分数

由图1A、B可知，峰1和峰2均为皂苷A。通过标准曲线方程（图1C）计算得出，样品中皂苷A质量浓度为8.365 7 μg/mL，即该批次PTS中皂苷A质量分数为1.673%。

2、PTS的有效成分-作用靶点网络

通过一系列数据库分析获得PFH的52 种已知成分，以口服生物利用率≥30%或药物相似性≥0.18、药物对小肠上皮细胞通透性≥0.4为指标筛选出20 种有效成分。通过Swiss等数据库，寻找PTS的有效成分对应靶点。其中FII和PTAFR的自由度较高，自由度越高说明中药成分与其之间的联系越紧密，预测成为有效靶点的可能性和准确性也越高，并且两者都是凝血相关通路上的主要目标靶点，所以将PTS有效成分及相关靶点Excel文件导入Cytoscape 3.4.2软件并利用该软件绘制出PTS的有效成分-作用靶点网络图（图2）。

3、PTS的蛋白-蛋白相互作用网络

将20 种有效成分的靶点代入Sting工具中，得到PTS的蛋白-蛋白相互作用网络图（图3），并进行KEGG通路富集分析和GO分析富集生物学过程分析，其中FII和PTAFR参与的KEGG通路主要有补体及凝血级联反应通路、血管平滑肌收缩相关通路以及钙离子信号通路等，研究目标参与的生物学过程主要有细胞表面受体信号通路、细胞增殖的调控以及代谢过程等。

4、PTS的抗凝血机制通路

以FII和PTAFR为关键词，在KEGG数据库中搜索，将得到的通路图重新组合，得到FII和PTAFR对应的凝血机制通路图（图4）。活化的FII可连接并切割蛋白酶活化受体（PAR）1和PAR4，活化的FII还可以直接和凝血调节蛋白结合，将蛋白C从酶原形式激活转变为活化蛋白C，在Ca 2+ 存在下可大大加快其激活过程，说明FII可能为PTS发挥抗凝血作用联系最紧密、可能性最大的靶点。

5、PTS存在情况下对APTT的影响

由表1可知，空白对照组APTT为（33.47±0.38）s。在4～32 μg/mL低分子肝素和8～128 μg/mL磺达肝癸钠对APTT有影响。由表2可知，在0～2 mg/mL范围内，PTS可剂量依赖性地延长质控血浆APTT。对样品（低分子肝素、黄达肝葵钠、PTS）终质量浓度与APTT进行线性拟合，并由拟合方程计算延长一倍APTT所需样品质量浓度，其结果见表3，人质控血浆APTT延长一倍所需的低分子肝素、黄达肝葵钠、PTS质量浓度分别为9.90、87.11 μg/mL和0.36 mg/mL。

6、PTS存在情况下对TT的影响

由表4可知，空白对照组TT为（9.53±0.58）s。2～24 μg/mL的低分子肝素和8～128 μg/mL的磺达肝癸钠对TT有影响。由表5可知，在0～2 mg/mL范围内，PTS可剂量依赖性地延长质控血浆TT。对样品终质量浓度与TT均值进行线性拟合，并由拟合方程计算延长一倍TT所需样品质量浓度，结果见表6，人质控血浆TT延长一倍所需的低分子肝素、PTS质量浓度分别为5.01 μg/mL、0.14 mg/mL。

7、PTS存在情况下对PT的影响

由表7可知，空白对照组的PT为（13.43±0.06）s。对样品终质量浓度与PT均值进行线性拟合，并由拟合方程计算延长一倍PT所需样品质量浓度，由表8可知，在8～128 μg/mL范围内低分子肝素、磺达肝癸钠和PTS质量浓度与TT均无显著的量效关系，即对人质控血浆PT都无显著影响。

8、PTS对FIIa和FXa活力的影响

由表9和图5可知，低分子肝素对抗凝血酶依赖的FIIa活力IC 50 为（0.06±0.00）μg/mL，随着低分子肝素、PTS质量浓度的增加，FIIa活力逐渐减小，PTS可剂量依赖性地抑制FIIa的活力，其IC 50 为（85.88±12.50）μg/mL，说明PTS是通过抑制FIIa活力即凝血酶活性来发挥其抗凝血作用。

9、PTS对FeCl3诱导大鼠颈总动脉血栓模型的影响

由图6及表10可知，空白组颈部总动脉血管腔内无血栓结构形成，血栓面积率为0.05%，如绿色箭头所指，血管各层膜结构明显。模型组血管腔内明显可见有闭塞性血栓结构形成，血管组织结构异常，管腔内可见大量混合血栓，导致管腔狭窄，红色箭头所示为大量纤维蛋白，黑色箭头所示为红细胞及少量血小板，动脉内膜内皮细胞数量减少，中膜显著变薄，结构不明显，血栓面积率为86.85%。

结论

PTS的抗凝血活性已有前期的研究基础，通过体内外实验证实了PTS的抗凝血、抗血栓作用，并首次发现其抗凝血作用的靶点为内源性凝血途径上的FIIa。在后续的研究计划中，本课题组将尝试提取分离出总皂苷含量更高的PTS并分离制备出一系列单一的皂苷类化合物，以期得到未见报道的新皂苷类化合物以及探究单一皂苷类化合物是否较PTS具有更强更有效的抗凝血活性。

本文《黄花倒水莲总皂苷抗凝血和抗血栓作用及机制：基于网络药理学》来源于《食品科学》2021年42卷23期206-213页，作者：刘育铖，毛思宇，李昱，胡倩梅，邹辉，冯星。DOI:10.7506/spkx1002-6630-20201016-149。点击下方阅读原文即可查看文章相关信息。

修改/编辑：袁艺；责任编辑：张睿梅

图片来源于文章原文及摄图网

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