在分离纯化的过程中，相信大家都会遇到极性很接近的样品，对于此类样品一般解决办法有很多如减少上样量、降低流速以及改变流动相的配比等，这些措施都能有效提升样品的分离度。若上述方法也不能改善分离度还可通过增加柱长来解决，增加柱长可直接更换大规格的色谱柱或者同内径色谱柱串联使用，当实验过程中没有大规格色谱柱时可选用同内径色谱柱串联的方法，现提供一个相关案例说明色谱柱串联的使用效果。
实验部分
1、样品信息
待分离样品是一种荧光染料类化合物，主要包含两个成分A和B，且两者极性极为接近（见图1）。产品结构式中含羧基，故需要添加适量的乙酸以降低产品拖尾的影响。
图1.待分离反应液点板图
2、样品制备
下表1为两次样品制备实验参数的对比。
表1.两次分离过程的条件对比
待分离样品用常规方法进行过一次分离但效果并不理想，通过图2可以看出A和B两个组分没有分离效果，最终通过点板确认只有部分A和B组分纯度达标，收集到的馏分中大部分是A和B组分交叉，根据此次分离的结果，对分离条件做了相应的优化。
图2.常规方式分离色谱图
分析上述实验结果，调整相关实验参数进行二次实验，主要是将12g和25g标准型快速分离柱（预填优质正相硅胶，40-63 µm, 60 Å）串联起来对样品进行分离纯化如图3所示，制备谱图及纯化后点板图见图4所示。
图3.分离柱串联示意图
图4.优化后的分离色谱图和点板图
根据图3可看出将2根色谱柱串联后在分离过程中产品在柱子中有明显的色带，根据图4可以很明显的看到两个组分完全基线分离，且通过TLC点板的初步鉴定，A和B组分纯度均合格。
结果与讨论
通过两次实验对比，我们可以发现将两根色谱柱串联后简单快速的增加了柱长且能达到很好的分离效果。为了更好的分离样品，实验过程中也对其他参数进行细微调整（表1），主要如下：
1. 降低产品上样量，将上样量由2g降到1.5g；
2. 改变流动相的配比，将甲醇的最高比例由10%降到5%左右；
3. 降低流速，由30 mL/min降到20 mL/min。
当然，色谱柱串联使用也具有一些缺点，对于溶解性较差的样品并不适用，会导致此类样品在分离过程中更易析出。本案例所用到的仪器型号为SepaFlash machine U200，由常州三泰科技有限公司生产。
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