复方活性成分及靶点鉴定1区！浙中医、省中联合揭示疏肝健脾调肠丸抗结直肠腺瘤的入血活性成分和候选靶点的多组学鉴定

【写在前面】：本期推荐的是由浙江中医药大学基础医学院、浙江中医药大学中国医学科学院、浙江中医药大学第一附属医院等研究团队合作近期发表于Phytomedicine(IF11.3）的一篇文章，揭示疏肝健脾调肠丸抗结直肠腺瘤的入血活性成分和候选靶点的多组学鉴定。

【期刊简介】

【题目及作者信息】

Multi-omics-guided identification of blood-entering bioactive components and candidate responsive targets of Shugan Jianpi Tiaochang Pill against colorectal adenoma

背景

结直肠腺瘤（CRA）是一种关键的癌前病变，内镜切除后复发或进展仍然具有挑战性。疏肝健脾调肠丸（TCP）是一种用于术后治疗的中药配方，其生物可利用成分和分子靶点的特征尚不充分。

方法

使用偶氮氧甲烷/葡聚糖硫酸钠（AOM/DSS）诱导的CRA小鼠模型来评估TCP。血清药物化学鉴定了进入血液的成分。蛋白质组学和网络药理学与转录组学验证、单细胞和空间转录组学以及虚拟敲除分析相结合，以确定候选靶点的优先级。分子对接、分子动力学模拟、表面等离子体共振（SPR）和具有靶向特异性敲除的HCT-116细胞实验提供了验证。

结果

TCP减轻了腺瘤样病变，减少了上皮增殖，没有明显的肝肾毒性。血清药物化学鉴定出28种进入血液的成分，结合蛋白质组学，显示线粒体能量代谢中与疾病相关的改变部分逆转。EPHA7和LDHB被优先作为TCP响应的候选目标。组织分析表明，TCP将EPHA7和LDHB的表达恢复到对照水平。汉黄芩苷和18β-甘草次酸对EPHA7和LDHB显示出良好的硅内结合和直接SPR结合，KD值为4.91-10.3μM，在促进凋亡的同时抑制HCT-116细胞活力。EPHA7或LDHB敲除部分减弱了相应化合物的抗增殖作用。

结论

汉黄芩苷和18β-甘草次酸被确定为候选生物可利用成分，EPHA7和LDHB被确定为可能与上皮-基质通讯、细胞外基质重塑和代谢调节相关的候选TCP反应靶点。这些发现支持了它们的功能参与，尽管还需要进一步的机制验证。

图文摘要

【前言】

结直肠腺瘤（CRA）被广泛认为是癌症（CRC）腺瘤-癌序列中的一种主要癌前病变，其术后复发和长期进展风险仍然是临床管理中的重要挑战。目前，内镜切除后进行风险分层监测仍然是CRA治疗的主要方法。然而，局部复发、异时性病变形成和重复结肠镜监测的长期负担表明，仍然需要更具针对性的药理学策略来预防腺瘤复发和进展。中医药在东亚已被广泛用于预防和治疗胃肠道癌前病变，无论是单独使用还是作为辅助治疗方法。它在抑制病变进展和降低复发风险方面显示出潜在的优势。疏肝健脾调肠丸TCP是根据CRA中“脾虚、湿热、气滞、毒瘀互结”的病理概念开发的中药方剂。它由11种草药组成，包括党参、白术、茯苓、柴胡、白芍、附子、补骨脂、肉豆蔻、薯蓣、甘草、生姜。临床上，TCP已被用于CRA患者的术后调理和复发预防。然而，其生物活性物质基础和与疾病相关的分子靶点仍未得到充分界定。

在这项研究中，我们将化学和血清药物化学分析与多组学和计算分析相结合，然后进行体外验证，以确定进入血液的成分，并优先考虑CRA中的候选TCP反应靶点。通过将TCP的生物可利用化学特征与疾病相关的分子改变和组织背景联系起来，这项工作提供了一个多组学指导的成分靶点发现框架，用于阐明TCP的药理学基础，并支持其在CRA中的进一步转化研究。

【结果部分】

1.TCP在体内缓解了AOM/DSS诱导的CRA进展。

2.TCP中血液进入组分的化学谱图分析与表征。

3.蛋白质组学分析揭示了小鼠结直肠组织中TCP响应性蛋白质的变化模式。

4.网络药理学方法揭示了TCP针对CRA的潜在组分相关靶点。

5.整合生物信息学分析将 EPHA7 和 LDHB 作为 CRA 中潜在的 TCP 受体响应靶点。

6.单细胞转录组学分析揭示了EPHA7在CRA中的基质富集现象及与CAF亚型相关的分布特征。

7.空间转录组学与虚拟基因敲除分析揭示了EPHA7与 LDHB 在CRA中的不同功能作用环境。

8.优先筛选的TCP生物活性成分与EPHA7及 LDHB 的分子对接分析。

9.EPHA7/LDHB 蛋白-配体复合物的分子动力学模拟。

10.EPHA7/ LDHB 与 18β-甘草次酸/银杏苷之间相互作用的表面等离子体共振（SPR）分析。

11.五味子苷与18β-甘草次酸可抑制 HCT -116细胞活力，并上调EPHA7与 LDHB 的表达水平。

12.TCP 在体内恢复了 EPHA7 与 LDHB 的表达；而靶向特异性基因敲除则减弱了 Wogonoside 与 18β-甘草次酸在 HCT -116 细胞中所发挥的抗增殖作用。

【结论与讨论】

总之，本研究提供了一个多组学指导的框架，用于鉴定进入血液的生物活性成分和TCP对CRA的候选反应靶点。汉黄芩苷和18β-甘草次酸被优先考虑作为代表性的血液进入成分，而EPHA7和LDHB被确定为具有不同基质通讯和代谢相关生物学背景的潜在TCP反应靶点。SPR分析支持这些代表成分和靶点之间的直接结合情况。靶向基因沉默实验提供了初步证据，表明 EPHA7 与 LDHB 在其抗增殖作用中发挥了部分作用。综合研究结果提示，TCP 可能是通过调控上皮-间质-ECM 代谢网络来干扰 CRA 的进展，而非通过单一靶点或信号通路发挥作用。这些发现深化了对 TCP 药理学作用机制的理解，并为在结直肠癌前病变中开展进一步的机制研究及转化医学研究提供了理论依据。

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