经典中药复方1区思路,值得大家学习: 浙中大团队揭示解毒祛瘀滋阴方靶向MAPK14抑制SAA3诱导的巨噬细胞M1极化改善系统性红斑狼疮

【写在前面】：本期推荐的是由浙江中医药大学基础医学院浙江省中医风湿病重点实验室、浙江中医药大学金华研究院、教育部自身免疫性疾病基础医学创新研究中心等研究团队合作近期发表于Phytomedicine(IF11.3）的一篇文章，揭示解毒祛瘀滋阴方通过靶向MAPK14抑制SAA3诱导的巨噬细胞M1极化改善系统性红斑狼疮。

【期刊简介】

【题目及作者信息】

Jieduquyuziyin prescription ameliorates systemic lupus erythematosus by targeting MAPK14 to inhibit SAA3-induced macrophage M1 polarization

背景

系统性红斑狼疮（SLE）是一种异质性自身免疫性疾病，涉及炎性巨噬细胞极化和肝脏急性期反应。狼疮易感小鼠血清淀粉样蛋白A3（SAA3）升高，可能参与肝脏炎症和巨噬细胞反应之间的免疫联系。解毒祛瘀滋阴方是临床治疗SLE的传统方剂，但其化学基础和SAA3相关的免疫调节机制尚不完全清楚。

目的

本研究探讨了JP对SLE相关炎症表型、肝细胞SAA3表达和巨噬细胞MAPK14/p38相关M1极化反应的影响，并研究了代表性JP成分与MAPK14之间的相互作用。

方法

MRL/Lpr小鼠用于评估JP的体内作用。LC-MS和HPLC用于化学表征。网络药理学、原代脾巨噬细胞、原代肝细胞和巨噬细胞幼稚CD4⁺ T细胞共培养系统用于表征JP相关的免疫反应。进行蛋白质印迹、流式细胞术、ELISA和免疫荧光，以评估p38磷酸化、巨噬细胞极化、细胞因子和SAA3。分子对接、SPR、分子动力学模拟和ADP-Glo™激酶测定用于评估代表性成分对MAPK14的结合和激酶活性的调节。

结果

JP治疗提高了MRL/Lpr小鼠的存活率和肾脏相关指标，同时血清SAA3水平降低，脾脏F4/80减少⁺ CD86⁺ 巨噬细胞和F4/80/iNOS信号减少。JP药物血清降低了SAA3诱导的p38磷酸化、iNOS表达以及IL-6和IL-1β的释放，同时增加了Arg-1表达和F4/80⁺ CD206⁺ 细胞。JP药物血清还降低了IL-6诱导的肝细胞中SAA3的表达。在共培养中，含有SAA3处理的巨噬细胞的系统显示CD4增加⁺ IL-17A⁺ 而JP治疗降低了这些读数。在JP煎剂和JP药物血清中检测到橙皮苷、甘草酸和芍药苷，并对MAPK14产生了可测量的结合反应。三种化合物混合物和单个成分降低了重组MAPK14激酶活性，混合物的活性更强。

结论

JP治疗与肝细胞SAA3表达降低、巨噬细胞MAPK14/p38相关的M1炎症反应减弱以及Th17相关炎症指数降低有关。MAPK14可以作为代表性JP成分参与的机制相关分子节点，为JP介导的SLE相关炎症网络的调节提供实验支持。

图文摘要

【前言】

系统性红斑狼疮（SLE）是一种慢性自身免疫性疾病，影响皮肤、肾脏、关节、中枢神经系统和其他器官。其特征是免疫耐受丧失、持续产生自身抗体和免疫复合物沉积。尽管针对B细胞、I型干扰素信号传导和糖皮质激素保留的疗法改善了管理，但复发、器官损伤和治疗异质性仍然是主要挑战。因此，识别连接炎症源、先天免疫扩增和组织损伤的调节节点对于理解SLE的炎症网络和确定潜在的干预靶点仍然很重要。

解毒祛瘀滋阴方（JP）是根据治疗系统性红斑狼疮的临床经验研制而成的。其治疗原则以“解毒、化瘀、滋阴”为中心，针对热毒积聚、血瘀、阴虚热等传统模式。JP由干地黄、制鳖甲、青蒿、白花蛇草、赤芍、积雪草、升麻、薏仁、佛手、生甘草等组成。在这个配方中，干地黄和制鳖甲主要滋阴清热；青蒿、白花蛇草清热解毒；赤芍、积雪草凉血化瘀；而生麻、薏仁、佛手、生甘草则调和气运、补脾、排湿、调方。先前的研究表明，JP可降低MRL/Lpr小鼠的炎症活性，并与IRAK1/NF-κB、PI3K/AKT、AMPK/mTOR和奈达酰化途径的变化有关。这些研究为JP在SLE中的应用提供了药效学基础，但其化学基础、直接分子靶点和SAA3相关的免疫调节步骤仍有待进一步联系。

本研究结合LC-MS/HPLC、网络药理学、体内和体外免疫测定、分子对接、SPR、分子动力学模拟和ADP-Glo™激酶测定，研究JP对肝细胞SAA3表达、巨噬细胞MAPK14/p38相关M1炎症反应和Th17相关指标的影响。我们进一步评估了代表性JP成分和MAPK14之间的可测量相互作用及其对MAPK14激酶活性的影响，旨在确定MAPK14在SLE炎症网络JP相关调控中的位置。

【结果部分】

1.JP的草本成分及LC-MS化学指纹分析。

2.JP相关靶点和SLE相关靶点的网络药理学分析。

3.经JP处理的MRL/Lpr小鼠的疾病表型与免疫指标。

4.JP药物血清浓度筛选及巨噬细胞极化标志物分析。

5.SAA3刺激下p38 MAPK 磷酸化及M1相关指标的分析。

6.经肝细胞条件培养基处理后，肝细胞SAA3表达及巨噬细胞M1极化相关的iNOS表达情况。

7.巨噬细胞与初始CD4⁺ T细胞共培养体系中的细胞表型与细胞因子水平。

8.HPLC对代表性JP成分的验证及MAPK14结合分析。

9.代表性JP组分与MAPK14复合物的分子动力学模拟。

10.对MAPK14/p38通路响应代表性JP成分的生化及细胞水平评估。

11.JP相关调控SAA3/p38 MAPK 通路介导的炎症网络示意图。

【结论与讨论】

本研究表明，JP可改善 MRL /Lpr小鼠中系统性红斑狼疮（SLE）相关的炎症表现及肾损伤，这些效应与循环中SAA3–巨噬细胞MAPK14/p38–IL-6–肝脏SAA3炎症放大环路的减弱有关。代表性成分，包括橙皮苷、甘草酸和芍药苷，均能与MAPK14结合并调节其激酶活性，提示MAPK14可能是多个JP成分共同作用的关键分子节点。这些发现为JP在SLE治疗中的作用机制提供了化学、细胞及药理学证据。

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