双特异性抗体靶点全局解读，筛选与功能验证工具分享

双抗和多抗是目前药物设计和免疫治疗领域的热门研究方向，也是美国癌症研究协会（AACR）、美国临床肿瘤学会（ASCO）等行业年会的重点关注话题。双特异性抗体能够同时作用于两个靶点，实现T细胞重定向、免疫细胞激活、双通路阻断、免疫微环境调节等。

6月初，多个企业在2026 ASCO年会上公布了双抗的研究进展，主要分为两大类技术路线。一类是“CD3+肿瘤抗原”，如CD3×EpCAM、CD3×DLL3、CD3×BCMA、CD3×GPRC5D、CD3×MUC16、CD3×CDH17等；另一类是“双通路阻断或免疫共刺激”，包括：PD-1×VEGF、PD-1×CTLA-4、PD-1×TIGIT、PD-L1×VEGF、PD-L1×4-1BB、GPC3×4-1BB等。

双抗开发需要高质量、高活性的靶点蛋白，是筛选双抗和功能验证的基础工具。义翘神州提供高纯度、经抗体结合验证的靶点蛋白，部分产品还经过生物类似药的活性验证。同时，义翘神州还提供蛋白定制开发、双抗生产服务及体外功能验证服务，为双抗开发提供一站式的产品和服务。

一、双特异性抗体的类型

双特异性抗体（bsAbs）的作用机制主要由三种方式：直接募集免疫细胞至肿瘤细胞、调控免疫信号通路和直接阻断致癌受体与配体间的相互作用。根据作用机制将其划分为三大功能种类：免疫细胞衔接型双抗、非细胞桥接型双抗和受体-配体阻断型双抗。

免疫细胞衔接型双抗包括靶向膜结合型肿瘤相关抗原（TAA）、HLA限制型肿瘤相关抗原的T细胞衔接器（TCE）、NK细胞衔接器及巨噬细胞衔接器。非细胞桥接型双抗以共刺激激动剂、免疫检查点抑制剂、肿瘤微环境调节蛋白为靶点。受体-配体阻断型双抗以阻断EGFR、MET、HER家族等致癌信号通路为主。

基于作用机制对双抗进行分类

（源自文献：doi: 10. 1016/j.lanepe.2026. 101599）

1、免疫细胞衔接型双抗

T细胞衔接器（TCE）能促进免疫效应细胞与肿瘤细胞之间形成免疫突触，诱导细胞毒杀伤作用。这类双抗将免疫靶点和肿瘤相关靶点关联，借助免疫细胞对表达靶点蛋白的肿瘤细胞进行杀伤。T细胞、NK细胞及其他先天免疫细胞均有相关研究。

TCE属于创新的生物工程抗体，能同时结合两个细胞上的不同抗原。通常一端为T细胞表面分子CD3，另一端为与肿瘤或自免疾病相关的特定抗原蛋白。获批上市的TCE双抗涉及到的靶点，血液瘤方面有CD3×CD19、CD20、BCMA、GPRC5D，实体瘤方面有CD3×DLL3。全球范围处于临床研究阶段的CD3双抗超过60种，仍以血液肿瘤为主，覆盖的靶点有CD19、CD20、BCMA、GPRC5D、CD123、LILRB4等。实体瘤靶点有DLL3、Claudin18.2、EpCAM、MUC16、GPC3、CDH17等。自身免疫疾病靶点主要集中在CD20、CD19、BCMA。

自然杀伤细胞衔接器（NKCE）主要靶向NK细胞表面受体，比如CD16a（FcγRIIIa）、NKG2D、NKp30、NKp46。CD16a研究较多，可强效激活NK细胞。NKG2D、NKp30、NKp46等可作为替代激活靶点，有利于持久免疫应答以及募集更多的免疫细胞亚群。NKCE平台多处于研发阶段，CD16a×CD30双抗在霍奇金淋巴瘤治疗中有潜力，CD16a×EGFR在胃癌和胰腺癌患者中观察到药效。

巨噬细胞衔接器双抗主要以CD47低亲和力加肿瘤相关抗原高亲和力设计为主。新兴的研究策略聚焦于直接激活CD40、C型凝集素样受体等巨噬细胞活化受体，将肿瘤微环境内的巨噬细胞重编程为促炎、杀肿瘤表型。

2、非细胞桥接型双抗

双免疫检查点抑制剂主要靶点有PD-1、PD-L1、CTLA-4等。双免疫抗体可同时作用于免疫应答的不同阶段，或同步阻断多重免疫抑制通路，实现单药难以达成的抗肿瘤协同效果。LAG-3、TIGIT、TIM-3等多高表达于终末期耗竭T细胞，常与PD-1共表达介导耐药。PD-1还会与细胞表面蛋白CD45、CD73组合成双抗。目前还有一个赛道研究较火热，即PD-1/L1与细胞因子（IL-21、IL-2、IL-15等）融合的双功能分子。

免疫检查点介导的T细胞调控与再激活

（源自文献：doi: 10.1016/j.clnves.2026.100064）

免疫细胞表面有多种共刺激或共抑制信号靶点，介导细胞的分化、激活、存活等，比如TNFRSF家族（如4-1BB、CD40、OX40、GITR、CD27、CD30等）、CD28免疫球蛋白家族（CD28、CTLA-4、PD-1、ICOS、BTLA等）。以4-1BB形成的双抗的TAA靶点有HER2、FAP、EGFR、PSMA、CLDN18.2、B7H4等。

二、重组蛋白在双抗开发中的应用

重组蛋白是双特异性抗体开发流程中的重要研究工具，涵盖早期靶点发现、抗体筛选、功能验证、工艺生产、质量控制等环节，比如通过ELISA、SPR等实验验证双抗的结合活性。

近期，南京鼓楼医院的研究团队发表了一篇题为“Non-superagonist CD28-based dual- signal T cell engager targeting”的文章，开发靶向KK-LC-1的非超激动型CD28双信号T细胞衔接器系统。研究人员使用设计锚蛋白重复蛋白（DARPin）作为结合骨架，替代scFv，构建KK-LC-1×CD3和KK-LC-1×CD28双抗，并通过表面等离振子共振（SPR）、流式细胞术、共聚焦显微镜、体内成像等技术评估了它们的生物学活性、靶向特异性及体内外的抗肿瘤疗效。结果显示抗体对阳性肿瘤细胞具有高亲和力和高特异性。体外细胞培养显示KK-LC-1×CD28显著增强KK-LC-1×CD3介导的T细胞激活和肿瘤细胞裂解效率，杀伤率提升至90%。在小鼠异种移植模型中，两种抗体联合治疗具有良好的协同抗肿瘤效果，抑制59.6%的肿瘤生长。研究人员加入PD-1×CTLA-4双抗还能进一步抑制肿瘤生长，小鼠的中位生存期从44天延长至48天。

在本次研究中，研究人员将人源CD3蛋白（购自义翘神州，货号：10977-H08H）与CD28蛋白（货号：90182-C08H）分别通过氨基偶联法固定于CM5传感芯片表面，进行SPR实验。结果显示KK-LC-1×CD3与CD3蛋白的解离常数KD为21.9nM，KK-LC-1×CD28与CD28蛋白的解离常数KD为74.3nM。

源自文献：doi:10.1136/jitc-2025-013246

三、义翘神州双抗解决方案

双抗开发需要高质量、高活性的靶点蛋白，是筛选双抗和功能验证的基础工具。义翘神州提供高纯度、经抗体结合验证的靶点蛋白，部分产品还经过生物类似药的活性验证。同时，义翘神州还提供蛋白定制开发、双抗生产服务及体外功能验证服务，为双抗开发提供一站式的产品和服务。

参考文献：

1、Elisa Fontana, et al. Evolution of bispecific and multispecific antibodies in cancer therapy. The Lancet RegionalHealth - Europe, 2026. https://doi.org/10.1016/j.lanepe.

2、Ying Liu, et al. Dual immune checkpoint blockade strategies for cancer therapy. Cell Investigation, 2026. https://doi.org/10.1016/j.clnves.2026.100064

3、Chen T, et al. Non-superagonistCD28-baseddual-signalT cellengager targeting. Journal forImmunoTherapy of Cancer, 2026. doi:10.1136/jitc-2025-013246

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