曝光！WB 图被查出拼接、手绘、复制条带，修图合规已成发表硬门槛

Western blot（WB）是生命科学蛋白定量检测的核心主流手段，近几年随着期刊对图像规范的要求不断细化，如何做好 WB 图像的记录与处理，成为很多科研人员在投稿过程中需要认真对待的环节。

2022 年美国癌症研究协会（AACR）对 1,367 篇论文的研究显示，约 40.8% 的论文图像问题都出在 WB 条带上。这一数字提示我们，不少问题可能并非源于主观造假，而是对规范不够熟悉所致。

图 1 被撤稿论文里，不同类型图像问题的分布

比如一篇结直肠癌相关论文陷入长期图像争议：该文刊发于《Cell Death & Disease》，曾被指出文章图 6G 多条 WB 条带高度重合，图像查重比对后可疑痕迹清晰可见；作者随后说明两组条带来自不同转印膜，相似仅为实验条件所致，并公开全套原始未裁剪膜图。

图 2 β-TrCP 和 IGG 条带与垂直拉伸后 P53R 显示的条带异常相似

另有一篇《Nature Aging》论文，其补充材料的 WB 图中存在明显拼接痕迹以及条带复用、局部修图等问题。

图 3 受到争议的 WB 条带

从这些案例中可以看到，WB 图像问题大致分为两类：直观可见的裁剪、复制泳道，以及隐蔽性更强的分区调色、无标注拼接条带。

了解期刊的具体要求，是避免无意间留下疑似篡改痕迹的第一步。基于这一行业背景，本文系统整理 WB 图像存档、定量归一化、论文作图全套标准化实操规范，帮助正在投稿的科研人避坑。

WB 修图：哪些操作期刊会重点关注

期刊和 AI 筛查系统通常会重点核查以下几类操作，这些行为无论是否有意，都容易引发质疑：

六大查重高危行为

选择性裁剪泳道：删掉阴性、无差异条带，只留存支撑实验结论的条带；

克隆复刻条带：复制局部泳道、条带片段，伪造独立生物学重复样本；

分区调色造假：局部单独调亮度对比度，人为拉大 / 缩小组间蛋白表达差值；

修图掩盖瑕疵：用修复、克隆画笔去除杂带、膜片污渍，隐藏实验原始缺陷；

无标注跨膜拼接：混用不同凝胶、不同曝光时长泳道，不加分割线、不图注说明；

形变规避查重：旋转、拉伸、翻转条带，改动原始成像形态躲避图像比对。

相比之下，期刊通常允许的操作范围相对明确：对整张膜统一微调亮度或对比度，并在图注中注明调整参数，这属于正常的图像优化。需要注意的是，用于论文中展示的美化图片和用于计算定量数值的原始图像应当分开，数据统计必须基于未经任何修改的原始图像。

原始文件的保存：投稿前提前整理好

期刊、合作者或同行有时会要求提供原始数据，提前整理好以下三类文件，会让这个过程顺畅很多：

第一类：无损原始文件，成像仪直出、零编辑 TIFF 原图，不可压缩、不可调色；

第二类：投稿定稿图片，所有修改操作全程留痕，标注完整处理步骤；

第三类：成像元数据表格，记录曝光、硬件全部参数，佐证实验条件统一可控。

换一种 WB 定量方式，或可规避这类风险

最后，即便有了细致的记录和透明的图像处理，蛋白质印迹数据的可靠性最终仍取决于这些图像如何被定量和解读。因此，归一化是图像完整性的关键延伸，可确保所观察到的差异反映的是生物学现象，而非上样或分析中的变异。

实践中，这种传统上通过光密度分析实现，即将条带强度归一化到单一上样对照，通常是 GAPDH 或肌动蛋白（actin）等管家蛋白。这种方法至今仍被广泛使用，但存在公认的局限。单一对照归一化假定上样对照蛋白在各实验条件下保持不变，且各泳道的总蛋白上样量一致。这些假定在每个实验体系中都需要加以验证。

而总蛋白归一化与总蛋白上样量（Stain-Free 及相关方法）一种替代的归一化方法是通过 Stain-Free 技术（例如 Bio-Rad Stain-Free 凝胶）或如 Ponceau S 这类可逆染色法进行总蛋白检测。Stain-Free 技术利用蛋白质中色氨酸残基在紫外激活下的固有荧光，无需额外染色即可检测和定量每个泳道的总蛋白，优势包括：

归一化到总蛋白，而非单一对照

检测单一管家蛋白可能遗漏的潜在上样不一致

减少膜剥离和重新探测的步骤

近期证据支持总蛋白归一化具有更高的可重复性。一项比较各归一化方法的分析[1]发现，与肌动蛋白或 β-微管蛋白归一化相比，Stain-Free 归一化降低了变异性，并将达到统计学显著性所需的样本量减少了 50% 以上。

在发表方面，《生物化学杂志》（Journal of Biological Chemistry）推荐归一化到总蛋白，但强调只有在研究者已证明管家蛋白的表达不受实验处理影响时，才可使用管家蛋白。最严谨的做法是在补充数据中同时报告总蛋白归一化值和管家蛋白归一化值，使读者能够评估结论的稳健性。

图 4 Stain-Free 技术在宽广的蛋白质浓度范围内提供总蛋白与信号之间的 1:1 对应关系。A，Stain-Free 总蛋白信号；B，β-肌动蛋白信号；C，β-微管蛋白信号；D，GAPDH 信号；E，在一系列蛋白质浓度范围内总蛋白归一化与管家蛋白归一化线性度的比较。

专业成像设备加持，筑牢数据合规防线

除了优选总蛋白归一化方法，专业成像设备也能为 WB 实验的数据合规与精准定量全面保驾护航。

Bio-Rad 的 ChemiDoc MP 成像系统兼具高性能化学发光与多色荧光成像能力，综合表现优于同类设备，可无缝搭配 Stain-Free 免染流程，在电泳、转印全环节完成质控，完美适配总蛋白归一化分析需求。

仪器搭载简易易上手的 Image Lab Touch 软件，上手门槛低，几分钟即可完成图像采集。它支持单膜同步检测三种蛋白，可精准区分并定量磷酸化等微小翻译后修饰，化学发光灵敏度更是媲美甚至超越传统压片法。

图 5 ChemiDoc MP 成像系统在 WB 实验中的作用

更可靠的是，设备采用专属 .scn 不可篡改原始数据格式，搭配账号权限分级、禁止数据删除与拷贝等多重安全管控，完整留存成像参数、时间戳等元数据，从硬件与软件双重维度筑牢原始数据防线，满足顶刊对 WB 图像溯源、数据完整性的要求。

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结论

图像合规、完整溯源、科学定量，是当下 WB 实验顺利发表的三大核心要点。

熟悉修图边界、做好文件存档，并根据实验体系选择稳定性更佳的 Stain-Free 总蛋白归一化方法，可以让实验数据更扎实、审稿更顺畅。

而专业设备是落实各项规范的重要支撑，ChemiDoc MP 成像系统不仅拥有高灵敏度成像、多色荧光同步检测等性能优势，还凭借专属数据格式、权限管控等功能杜绝原始数据篡改问题，全程匹配顶刊溯源要求，结合 Stain-Free 流程实现全环节质控，全方位为 WB 实验的数据合规与科研诚信保驾护航。

注：

1. 相关产品仅限科研使用，不作为临床诊断。

2. Bio-Rad 为 Bio-Rad Laboratories, Inc. 在特定区域的商标。本文所使用的所有商标均归其各自所有者所有。© 2026 Bio-Rad Laboratories, Inc.

3. 本活动的最终解释权归伯乐生命医学产品（上海）有限公司。

内容策划：沈佳钰

内容审核：周育红

题图来源：图虫创意

参考文献：

[1] Maloy A et al. (2023). Stain-Free total-protein normalization enhances the reproducibility of Western blot data. Anal Biochem 654, 114840.