北京
图1。左侧海马神经元培养物，分别表达带有GFP和mScarlet标签的受体和支架蛋白。两种荧光团结合的最大强度投影。488和561纳米激发，Optosplit 550纳米二色镜，图像在Cairn Research ImageJ插件中对齐。右侧平均FRET信号(8位，最大值255)，来自10帧图像(总曝光时间100毫秒)。对最大投影进行阈值处理，并用于掩蔽FRET计算，将其限制在细胞突起区域。FRET计算在IGOR Pro中完成。图像处理在ImageJ中进行。
背景
ThePlested实验室研究与神经系统相关的受体特征。他们采用多种技术对分离的神经元进行成像，包括电生理学与荧光活细胞成像的结合。
他们的研究领域之一涉及测量神经元在电刺激下的福斯特共振能量转移(FRET)。他们使用合适的荧光团标记相关的单个结构和受体，并观察目标细胞树突区域的FRET信号。这使他们能够获取有关通道状态、定位和行为的信息，特别是它们在纳米范围内的共定位情况。
挑战
该群体感兴趣的个体相互作用仅持续极短的时间(10-100毫秒)。因此，为了捕捉由供体荧光团向受体分子能量转移产生的微弱信号，需要极速成像。这意味着可用于检测的光子数量非常有限，极高灵敏度的成像设备至关重要。
他们目前使用的EMCCD相机——尽管灵敏度足以进行检测——但只能成像非常小的视野，这使得实验测量变得十分耗时。FRET测量还受到EMCCD相机每帧30毫秒读取时间的限制，在全视野下仅能达到30 fps(对应约15 fps的FRET)。此外，为了提高帧率，必须使用像素合并技术，但这会降低空间分辨率。
Prime 95B 让我们能够以大约两倍的速度观察 5 倍的视场，同时保持与我们之前的 EMCCD 系统相同的灵敏度。——安德鲁·普莱斯特教授
解决方案
ThePrime 95B 科学级 CMOS 相机为 Plested 博士的实验带来了三个关键优势：灵敏度、视野(FOV)和速度。
首先，相关的激发功率可以降低 5 倍——从而提供更具生理相关性的测量结果，并减少由漂白引起的伪影。
其次，Prime 95B 更大的传感器带来了约五倍的视野，从而大幅提升了每次实验中细胞区域的通量。
最后，随着视野的扩大，帧率也可以提高。通过以50 fps进行成像(有效FRET测量为25 fps，采用交替激发，见图1)，数据与突触传递(感兴趣的时间尺度为10-100 ms)更加相关。这意味着他们的测量现在受限于探针特性，而非相机。
Prime 95B为Plested实验室提供了一种改进的数据获取方式，从基本上是单物体成像转变为多神经突起视野，从而对突触传递提供了更详细的见解。
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