Biotin Phalloidin，生物素标记鬼笔环肽试剂基本属性

Biotin Phalloidin（生物素标记鬼笔环肽）的操作规范与注意事项
1. 化学本质与结构特性
分子式：C57H83N13O13S4
分子量：1286.61
Biotin Phalloidin由鬼笔环肽（Phalloidin）与生物素（Biotin）通过化学连接臂（如双酯键或柔性碳链）共价结合形成。
鬼笔环肽：源自毒蘑菇（如鹅膏菌），是一种分子量约700-1200 Da的双环肽，含硫醚桥结构，能特异性结合纤维状肌动蛋白（F-actin），抑制其解聚。
生物素：维生素B7衍生物，分子量小（244 Da），与链霉亲和素/亲和素结合力极强（Kd≈10⁻¹⁴ mol/L），用于信号放大。
连接臂设计：如“XX”柔性碳链（如两个6-氨基己酸单元），减少空间位阻，提升生物素可及性，增强结合效率。
2. 核心功能与优势
高特异性标记F-actin：仅结合聚合态肌动蛋白，不识别单体G-actin，背景染色极低。
信号放大能力：通过生物素-链霉亲和素系统实现多价结合（1个链霉亲和素结合4个生物素），显著提升检测灵敏度。
模块化检测灵活性：可与荧光素（如Cy3、Alexa Fluor系列）、酶（HRP、AP）、量子点或金纳米颗粒偶联，适配荧光显微镜、共聚焦成像、电子显微镜或酶联检测等多种技术。
高分辨率成像：清晰显示微丝结构（如应力纤维、皮层网络、丝状伪足），支持亚细胞结构解析。
样本稳定性：形成的复合物稳定，标记后样本可长期保存。
3. 应用场景
细胞骨架研究：观察细胞形态、迁移、分裂过程中F-actin的动态变化。
多色荧光成像：与靶向微管蛋白、细胞核的探针联用，解析细胞骨架与其他结构的空间关系。
免疫组织化学：通过链霉亲和素-HRP系统定位组织中的F-actin，适用于无荧光显微镜的场景。
电子显微镜观察：结合酶介导的链霉亲和素技术，实现F-actin超微结构可视化。
无细胞体系研究：分析F-actin体外组装过程。
4. 操作规范与注意事项
样本处理：
固定：用4%多聚甲醛（室温10-15分钟），避免甲醇或丙酮破坏肌动蛋白结构。
透化：0.5% Triton X-100（PBS配制，室温10分钟），过度透化增加背景噪音。
染色条件：
储备液配制：甲醇溶解，浓度100 units/mL，-20℃避光保存。
工作浓度：高于荧光直接标记鬼笔环肽（如10 μL储备液/200 μL染色体积）。
孵育时间：室温避光20分钟，延长孵育可能增加非特异性结合。
检测步骤：
染色后PBS洗涤3次（每次5分钟），去除未结合试剂。
加入荧光/酶标记的链霉亲和素，室温避光孵育15-20分钟，再次洗涤后成像。
对照设置：
阴性对照：不加探针或用未标记鬼笔环肽竞争性抑制。
阳性对照：选用F-actin结构清晰的细胞（如成纤维细胞）。
环境控制：全程避光，缓冲液pH 7.0-7.4（避免高pH破坏硫醚桥结构）。
试剂兼容性：避免与强去污剂或高盐溶液混合，防止结构破坏或结合抑制。
5. 储存与安全
未开封试剂：-20℃避光干燥保存，避免反复冻融。
已配制储备液：-20℃避光保存，有效期内使用。
【相关试剂】
Biotin-XX Phalloidin
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