近日,西北农林科技大学园艺学院胡晓辉教授课题组在《Plant, Cell & Environment》期刊上发表题为“The SlMYC2‐SlNAC90‐SlNAC102 Module Mediates Low-Temperature Stress Responses in Tomato by Regulating Jasmonic Acid Biosynthesis”的研究成果。孟祥光博士为论文第一作者,胡晓辉教授为通讯作者。
研究团队基于前期番茄低温转录组数据,筛选到NAC家族成员SlNAC90——其表达受低温(4℃)和JA显著诱导。通过CRISPR-Cas9基因编辑和过表达技术构建SlNAC90转基因株系,发现过表达SlNAC90的番茄在低温处理后仍保持健康生长,而敲除株系出现严重萎蔫;生理指标显示,过表达株系的相对电导率(REC)、丙二醛(MDA)含量显著降低,过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性显著升高,同时光合系统II最大光化学效率(Fv/Fm)更稳定,活性氧(ROS)积累量减少,证实SlNAC90是番茄低温响应的正调控因子。
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图1 SlNAC90过表达与敲除株系的低温表型及生理指标差异
为解析SlNAC90的作用靶标,研究通过酵母单杂交(Y1H)、凝胶迁移率变动实验(EMSA)、染色质免疫共沉淀-定量PCR(ChIP-qPCR)及双荧光素酶报告实验(Dual-Luc),证实SlNAC90可直接结合JA合成关键基因SlLOXC的启动子“CACG”基序,激活其转录。SlLOXC作为13-脂氧合酶(13-LOX)家族成员,是JA合成的限速酶——过表达SlLOXC可使低温下番茄叶片JA含量显著提升,ROS清除能力显著增强;而敲除SlLOXC则导致JA含量显著下降,低温敏感性显著增加,明确了SlLOXC是SlNAC90调控JA合成的直接下游靶基因。
进一步研究发现,SlNAC90可与另一个NAC家族成员SlNAC102发生蛋白互作(通过Y2H、GST Pull-Down、双分子荧光互补(BiFC)及荧光素酶互补成像(LCI)验证)。尽管SlNAC102自身不能结合SlLOXC启动子,但与SlNAC90互作后可显著增强SlNAC90对SlLOXC的结合与转录激活能力——Dual-Luc实验显示,两者共表达时SlLOXC的LUC/REN活性较SlNAC90单独表达显著提升,证实SlNAC102是SlNAC90的关键共激活因子。最后,研究团队聚焦JA信号通路核心转录因子SlMYC2,发现其表达同样受低温和JA诱导,且可通过结合SlNAC90、SlNAC102启动子的“G-box”基序(-CACGTG-),促进两者转录。
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图2 SlMYC2-SlNAC90-SlNAC102-SlLOXC模块调控番茄低温胁迫模式图
论文链接:
https://doi.org/10.1111/pce.70268
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