微生物限度检查的结果判定标准是什么

微生物限度检查的结果判定，严格遵循《中华人民共和国药典》（ChP）通则 1107《非无菌药品微生物限度标准》及相关配套通则（1105 微生物计数法、1106 控制菌检查法），核心围绕微生物计数结果和控制菌检出情况两大维度，结合样品类型（如口服制剂、外用制剂、原料等）的限度要求，综合判定是否合格。以下是具体判定标准及逻辑流程：

一、核心判定前提：检验方法需符合 “适用性要求”

在结果判定前，需先确认微生物计数法（1105）和控制菌检查法（1106）的方法适用性试验合格：

1. 计数法：试验组的菌回收率需在 50%~200%（薄膜过滤法）或 70%~150%（平皿计数法）范围内，且阴性对照无菌生长，确保样品基质无抑菌 / 杀菌干扰；
2. 控制菌检查法：阳性对照需检出目标控制菌，阴性对照无菌生长，确保方法能有效分离和检出控制菌。若方法适用性试验不合格，需优化样品前处理（如稀释、中和抑菌成分）后重新检验，否则结果无效。

二、微生物计数结果判定（需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数）

计数结果判定的核心是 “实测值≤规定限度”，同时需满足平行样允许偏差要求，具体步骤：

1. 结果计算规则

按通则 1105 规定的方法（平皿法、薄膜过滤法等）计数，取平行样的平均菌落数，结合样品稀释倍数计算 “每 1g/1mL/10cm²” 的微生物总数（单位：cfu）；若菌落数在规定限度的 10 倍以内（如限度 10³cfu/g，实测 10⁴cfu/g），需重新检验（增加稀释梯度或平行样数量）；若重新检验后结果仍超出，判定为不合格。

2. 允许偏差要求（平行样一致性）

• 菌落数≤10 cfu / 皿时，平行样绝对偏差≤2；
• 菌落数 11~100 cfu / 皿时，平行样相对偏差≤25%；
• 菌落数 101~300 cfu / 皿时，平行样相对偏差≤15%；
• 菌落数＞300 cfu / 皿时，平行样相对偏差≤10%。若平行样偏差超出上述范围，需排查操作误差（如稀释不均匀、污染）后重新检验，否则结果无效。

3. 最终判定标准

• 合格：实测微生物总数（需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数）均≤对应样品的规定限度（如普通口服片剂不含药材原粉：需氧菌≤10³cfu/g，霉菌酵母≤10²cfu/g）；
• 不合格：任一微生物总数实测值＞规定限度，或平行样偏差过大且无法排除误差。

三、控制菌检查结果判定（大肠埃希菌、沙门菌、耐胆盐革兰氏阴性菌等）

控制菌判定核心是 “是否检出目标菌”，分 “不得检出” 和 “限度检出” 两类情况：

1. 不得检出类控制菌（如大肠埃希菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌等）

• 合格：供试品溶液的所有接种平板 / 增菌液中，均未检出目标控制菌（需结合生化鉴定确认，如大肠埃希菌的靛基质试验、沙门菌的血清学鉴定）；
• 不合格：任一接种平板 / 增菌液中检出目标控制菌（阳性对照需同时检出，确保方法有效）；若疑似菌落经鉴定为非目标菌，需重新检验，仍疑似则按 “检出” 判定。

2. 限度检出类控制菌（如耐胆盐革兰氏阴性菌，限度≤10²cfu/g）

• 合格：按规定方法计数，实测值≤规定限度，且平行样偏差符合计数法要求；
• 不合格：实测值＞规定限度，或检出目标菌但计数超出范围。

3. 特殊情况：阴性对照与阳性对照要求

• 阴性对照：全程无任何微生物生长（若污染，需排查实验室环境、试剂、操作，重新检验）；
• 阳性对照：需明确检出目标控制菌（若未检出，说明方法无效，需优化后重新检验）。

四、不同样品类型的通用限度参考（ChP 2020 年版通则 1107）

结果判定需结合样品的具体限度要求，以下为常见制剂的核心限度（节选），最终以对应品种的药典标准为准：

• 普通口服片剂（不含药材原粉）：需氧菌总数≤10³cfu/g/mL，霉菌和酵母菌总数≤10²cfu/g/mL，控制菌要求为不得检出大肠埃希菌，含脏器提取物需额外不得检出沙门菌；
• 口服片剂（含药材原粉）：需氧菌总数≤10⁴cfu/g/mL，霉菌和酵母菌总数≤10²cfu/g/mL，控制菌要求为不得检出大肠埃希菌、沙门菌，耐胆盐革兰氏阴性菌≤10²cfu/g；
• 外用软膏剂（非无菌）：需氧菌总数≤10²cfu/g/mL，霉菌和酵母菌总数≤10¹cfu/g/mL，控制菌要求为不得检出金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌；
• 药用原料（非无菌）：需氧菌总数≤10³~10⁴cfu/g/mL（依原料特性而定），霉菌和酵母菌总数≤10²cfu/g/mL，控制菌要求为不得检出大肠埃希菌，部分原料需控制沙门菌。

五、结果判定的特殊情况处理

1. 疑似污染：若供试品菌落形态异常、阴性对照污染，需立即排查实验室环境（如洁净度、操作台消毒）、试剂（如培养基污染）、操作流程（如无菌操作规范），重新检验；
2. 抑菌成分干扰：若样品含抑菌成分（如抗生素、防腐剂），未进行中和处理导致计数偏低或控制菌未检出，需优化前处理方法（如加入中和剂、增加稀释倍数）后重新检验；
3. 结果复查：初次检验不合格时，需按药典规定进行复查（如另取 2 个独立样品，按相同方法检验），若复查结果仍不合格，最终判定为不合格；若复查合格，需排查初次检验的误差来源（如操作失误、污染），必要时第三方验证。

六、最终判定结论

综合以上维度，满足以下条件可判定为 “微生物限度合格”：

1. 方法适用性试验合格；
2. 需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数均≤规定限度，平行样偏差符合要求；
3. 规定的控制菌 “不得检出” 类未检出，“限度检出” 类实测值≤限度；
4. 阴性对照无污染，阳性对照检出目标菌。

若任一条件不满足，均判定为 “微生物限度不合格”，该样品不得出厂、销售或使用。