UV-Tracer Azide NHS Ester的操作规范与实验流程

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产品名称：UV-Tracer Azide NHS Ester，紫外可追踪叠氮-NHS酯的操作规范与实验流程
1. 操作规范与实验流程
储存与溶解
长期保存：-20℃以下避光干燥保存，分装避免反复冻融；复溶后建议分装冻存于-80℃。
工作液制备：使用无水DMSO或DMF溶解，终浓度1-10 mM；水相反应需现配现用，避免NHS酯水解。
标记反应
NHS酯偶联：目标分子（如蛋白质）溶于无水缓冲液（如PBS，pH 7.0-8.5），按1:10-1:50摩尔比加入UV-Tracer Azide NHS Ester，室温避光反应1-2小时；反应后通过透析、凝胶过滤或HPLC纯化。
点击化学反应（CuAAC体系）：炔烃化合物（如BCN-alkyne）+ UV-Tracer Azide + CuSO₄（1 mM）+ THPTA（5 mM）+ 抗坏血酸钠（10 mM），pH 7.0-8.0，室温避光反应1-2小时；无铜体系（SPAAC）使用DBCO-修饰分子，37℃避光反应30分钟。
检测与验证
荧光验证：紫外灯下观察荧光信号，或通过荧光光谱仪检测激发/发射波长偏移。
电泳验证：SDS-PAGE分析标记蛋白迁移率变化，HPLC检测纯度（≥95%）。
活性验证：流式细胞术或共聚焦显微镜评估标记效率及生物活性保留。
2. 稳定性与质量控制
光稳定性管理：避光操作（铝箔包裹容器），控制光照时间与强度；添加抗氧化剂（如维生素C）延缓光漂白。
化学稳定性：避免极端pH（<4或>9）、高温（>40℃）或蛋白酶（如胰蛋白酶）导致的降解；使用蛋白酶抑制剂（如PMSF）保护标记产物。
批次一致性：验证标记效率及生物活性，确保实验重复性；纯化后通过质谱、核磁共振或流式细胞术验证。

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