ipofect5000 prime--从转染性能上真正平替Lipo3000的转染试剂

市面上主流的细胞转染试剂有很多，虽然它们研发材料不同、价格不同，但通常都具备既能转质粒又能转siRNA的性能。其中，当属赛默飞lipofectamine3000的影响力是最大的，但近年来其价格逐渐上涨，很多研究者也在寻求能够从性能上真正平替它的转染试剂。我们实验室就试用过多款宣称能平替3000的转染试剂，综合比较下来发现，lipofect5000 prime是性能上最为接近lipofectamine3000的，并且价格才不及其五分之一。

接下来，我们就从转染性能、细胞毒性和操作简便性三方面来比较一下这两款试剂。

一、转染性能

通过多次平行实验比较，我们发现lipofect5000 prime无论是转质粒还是转siRNA，性能上可以说完全能够媲美lipofectamine3000。

1.质粒转染性能

我们首先在Hela细胞（人宫颈癌细胞）中进行GFP质粒的转染比较，两款试剂24h转染荧光图如下，结果显示均达到了80%以上的转染阳性率。作为转染难度中等的Hela细胞，lipofectamine3000和lipofect5000 prime能达到这样的转染效率，已然超过了市面上绝大多数转染试剂。

除了难度中等的Hela以外，我们在难度较高的神经细胞SH-SY5Y（人神经母细胞瘤细胞）中也对它们进行了比较。结果显示，lipofect5000 prime质粒转染阳性率可达60%以上，而lipofectamine 3000仅有10%左右的转染效率，看起来lipofect5000 prime似乎更具备驾驭难转细胞的性能。

2.siRNA转染性能

同样的，我们也在Hela细胞中验证了两款试剂的siRNA转染性能，分别进行了NC-FAM和SSB基因的siRNA（si-SSB）转染，通过倒置荧光显微镜和RT-qPCR实验技术检测了lipofectamine3000和lipofect5000 prime的转染阳性率以及对SSB基因的沉默效率。结果显示，转染阳性率上两款试剂均可达到90%以上，基因沉默效果分别为85%（lipofectamine 3000）和83%（lipofect5000 Prime），两者siRNA转染性能几乎相同。

二、细胞毒性

评判一款转染试剂细胞毒性的高低主要看转染后细胞的死亡率，而细胞死亡率往往又与转染试剂的研发成分息息相关。

lipofect5000 prime或许就是得益于其成分为可降解生物纳米材料，毒性确实要比lipofectamine 3000小很多，转染后细胞死亡率仅5%左右，而lipofectamine 3000转染后细胞死亡率要达到20%左右。这一点作为研究者要着重关注，尤其是在转一些原代细胞的时候，尽量使用作用温和，毒性低的试剂。

下面是我们用lipofect5000 prime在原代大鼠主动脉平滑肌细胞中进行质粒转染的明场图与荧光图，死亡率也依然只有5%左右。

三、操作简便性

熟悉lipofectamine 3000的研究者都知道，配制转染复合物的时候需要额外使用到Opti-MEM培养基，加上转染试剂整体实验成本是比较高的，而lipofect5000 prime在复合物配制时直接使用其中配套的Trans buffer S即可，尤其对缺乏转染经验的新手来说十分方便。

除了特殊培养基以外，操作简便性还可从是否需要换液来比较。这一点，两款试剂说明书中均未提及，也就是说无需换液，但大多数研究者还是保留了使用lipofectamine 3000转染后6-8 h换液的操作，主要还是出于对其细胞毒性的担忧。

从以上几方面综合来看，如果大家主要追求转染效果，那么在一些普通贴壁细胞中，用lipofectamine 3000或是lipofect5000 prime都可以；转一些敏感较难转染细胞的话，可以优先尝试毒性较小的lipofect5000 prime；如果主要看重性价比、寻求平替lipofectamine 3000的试剂，那么入手lipofect5000 prime将是一个不错的选择。