线下沙龙 | 生物制品宿主细胞残留控制：工艺优化与检测技术研讨

近年来，随着细胞工程、细胞系开发、培养基和培养条件优化技术的不断进步，细胞的生产能力也在逐步提高。然而，更高的细胞密度与更长的培养周期也导致工艺杂质激增，其中宿主细胞蛋白残留尤为关键。

HCP残留：生物制品质量的“隐形威胁”

宿主细胞蛋白（Host Cell Protein，HCP）是指生物制品中来自生产细胞系的宿主细胞的蛋白成分，主要包括宿主细胞分泌的蛋白以及细胞凋亡、代谢产生的部分结构蛋白。

HCP残留的种类由宿主细胞类型和亚型决定，其含量受表达体系、表达方式、纯化工艺和药物种类的影响。每种HCP都有其独特的理化活性和生物功能，部分高风险型HCP能引起免疫原性而发生临床安全性风险，也可能引起药物降解而影响产品质量。

因此，在绝大多数情况下，HCP残留被认为是生物制品的关键质量属性（CQA），需要在成品和原液的放行检测以及中间产品的工艺控制中重点关注。

HCP法规监管要求

为确保药物的安全性和有效性，许多国家和地区的药品监管机构都要求生物药物在上市前必须进行HCP残留的检测。制药企业应严格遵守相关法规要求，采用合适的检测方法和控制策略，确保HCP残留量在可接受范围内。

• 中国药典：2020版通则3414规定HCP残留≤ 500ppm（ppm即百万分之一）

• 美国药典（USP<1132>）：要求HCP残留< 100ppm，推荐ELISA为首选方法。

• 欧洲药典（EP 2.6.34）：规定HCP残留< 0.1%（1000ppm）。

• ICH Q6B：要求采用敏感方法监测HCP，通常残留量< 100ppm。

核心共识：工艺开发需验证HCP清除能力，最终产品残留限值中美的推荐限度值均需≤0.01%。

HCP检测方法

测定生物制药中HCP残留检测方法主要包括基于特异性抗体的酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫印迹法，以及以液相色谱-质谱（LC-MS）法为代表的非免疫特异性方法。

表1：不同HCP残留检测方法的优缺点比较

其中，ELISA法因其高可及性、高灵敏度及低定量限的优势一度成为生物制品HCP放行检测及工艺控制的金标准。双抗夹心法ELISA与竞争性ELISA相比，大大提高了检测的灵敏度和特异性，是检测HCP最常用的一种ELISA方法。

采用ELISA法进行HCP分析时，检测准确性高度依赖抗体库的覆盖率——未被抗体特异性识别的HCP、低亲和力结合的HCP易被漏检或低估含量，而高亲和力结合的HCP 则可能因信号放大效应被过度量化，最终导致检测结果偏离真实残留水平。

因此，在关键临床样本及商业放行测试前，需评估试剂盒抗体对HCP蛋白组的覆盖率。此外，特异性抗体方法只能定量分析HCP总量或单个蛋白质，无法全面监测所有HCP种类及其含量分布。

为弥补ELISA方法的局限性，液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）逐渐成为一种高通量、高灵敏度检测HCP残留的方法，通过液相色谱分离不同类型的HCP和药物，并利用质谱图与数据库对每种HCP进行确认和表征。

LC-MS/MS法非特异性的特点避免了亲和力歧视问题，使定量结果更准确。此外，该方法还能在高丰度单克隆抗体（mAb）药物背景下检测低至10~0.1ppm的残留HCP。对于高风险型HCP，通过建立靶向质谱分析方法可以有效识别并监控其清除情况，促进相关的风险评估。

目前，在多数情况下，质谱法作为表征方法与ELISA法共同监测生物制品中的残留HCP，暂未独立用于残留HCP的质量控制。每种检测方法都各有其优缺点，在实际应用中，可以根据实验目的、样品特性、准确性和操作便捷性等进行选择，多种方法结合使用来获得更全面和准确的结果。

行业难点直击：HCP检测的三大挑战

以重组蛋白药物为例，质控中HCP检测可能存在以下难点：

（1）样品中仅有少量或痕量的HCP，其残留限度的监管标准通常为1-100ppm，而大量存在的重组蛋白物很可能影响检测；

（2）样品中的HCP种类多样，且很可能随着工艺发生变化；

（3）所用的检测方法需能在短时间内测定大量不同的杂蛋白。

HCP残留检测是生物制药质量安全的生命线，更是实现工艺优化的核心关卡。7月5日（周六）13：30-18：00，诺唯赞联合生物制品圈在苏州发起以“生物制品宿主细胞残留控制：工艺优化与检测技术研讨”为主题的线下沙龙活动，深度聚焦宿主蛋白残留检测工艺优化与检测技术创新，共筑生物制药质量安全防线。

一、活动信息

1、活动时间：2025年7月5日（周六）13:30-18:00

2、活动地点：苏州（定向通知）

3、参与人员：仅限生物制药行业从业者、监管机构从业人员参与。

4、参与方式：扫描下方二维码或点击 “阅读原文”，填写个人信息即可报名。

5、活动规模：拟招募30人左右，采用审核及定向邀约制度。

6、参与规则：主办方将对报名信息进行审核，通过者将收到定向邀请函，最终参与资格以工作人员通知为准。

二、环节设置

Part1 分享环节议题

1、工艺攻坚：工艺研究中有效去除宿主细胞蛋白的方法和案例

2、法规解码：生物技术药物宿主细胞残留检测法规解读

3、技术迭代：在生物制品中应对HCP分析挑战——从ELISA检测试剂盒开发到LC-MS表征分析

4、检测实战：复杂分子中残留检测方法的开发和挑战

5、解决方案：生物制品宿主残留质控攻略，构筑生物制品安全防线

Part2 讨论环节议题

1、新版中国药典关于残留检测有哪些新的指导?

2、基于各指南的差异度，对于不同区域申报残留检测有何考量？

3、工艺杂质残留检测试剂的变更在不同阶段，如Ⅲ期前、Ⅲ期后及上市后的具体要求有什么不同？

4、如何考量2D、质谱和ELISA正交方法的联合使用及具体案例分享？

参考资料：

[1]王平,刘岩峰.论工艺特异性宿主细胞蛋白检测方法在重组蛋白药物质控中的必要性[J].实验室检测,2025,3(01):128-130.

[2]谢力琦,王静,朱添怡,等.生物质谱在生物制品宿主细胞蛋白残留分析中的应用[J].质谱学报,2024,45(02):193-200.

[3] 超全！ 宿主细胞蛋白残留检测的法规要求和检测方法宝典来了！ 贝克曼库尔特生命科学. 2024年05月30日.

[4] 宿主细胞残留蛋白(HCP)检测的法规要求和方法选择. 生物制品圈. 2024年07月09日.

[5] 宿主细胞残留蛋白(HCP)检测的问题挑战及其解决方案探讨. 依科赛生物. 2024年06月04日.

[6] 从生物制药制剂中去除宿主细胞蛋白：迈向质量源于设计的实践. 知山识海. 2025年06月08日.

[7] 宿主细胞蛋白（HCP）残留检测方法分享. 泰澧生物TarleadBio. 2025年02月14日.

[8] 学习笔记 | 生物制品宿主细胞蛋白（HCPs）残留检测简介. 基因狐. 2024年06月24日.

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