想 玩转载体构建，必须看这篇！

获取基因的最终目的是构建表达载体，使得目的基因在宿主中表达。技术路线主要有2条：

一、经典路线：目的基因⇨克隆载体⇨表达载体

经典路线：需要先把目的基因插入克隆载体（中间载体），测序正确后，再通过酶切或PCR获取目的基因，经过DNA纯化，与线性化的载体在T4连接酶的作用下构建出表达载体。

以前用的较多的中间载体是T4连接酶原理的载体，至少需要2个小时（甚至需要过夜连接）才可以做到涂板步骤，然后第一代TOPO载体把时间缩短至1.5小时，第二代TOPO载体引入了自杀基因，提成高了转化子的阳性率，金百特生物进一步优化，于7年前，推出第三代TOPO克隆载体，成功把时间缩短至15-20分钟，阳性率接近100%，几乎可免菌P!

用过的都说好！

二、快捷路线：目的基因⇨表达载体

快捷路线：采用Gibson无缝克隆技术，直接把目的基因插入表达载体，一步到位！

Gibson无缝克隆通过T5 exonuclease、Phusion DNA polymerase、Taq DNA Ligase三种酶的协同作用，能高效地把目的基因定向克隆至表达载体的任意位点。

这个系统最厉害的是，这三种酶都可以在50℃的条件下很好的发挥功能，表现出近乎完美的协同效应！非常适合用来构建表达载体，也适合用于拼接多个线性DNA片段。

• T5 核酸外切酶：从 5’ 到 3’ 方向消化 DNA 片段，形成单链突出区域。

  
  

• Phusion 高保真酶：同源臂互补配对后，延伸补齐片段上的缺口部分。

  
  

• Taq DNA 连接酶：将 DNA 片段连接起来，形成无缝的双链DNA，也就是质粒。

• 使用简单：兼容 PCR 体系与酶切体系，省去繁琐的纯化步骤，显著缩短实验时间。

• 超高效率：支持1～5 个片段的组装，适用于复杂构建体的构建。

• 稳定可靠：37℃ 放置一周或冻融 30 次后，性能无明显下降，确保实验结果的稳定性

质控：把 3000bp DNA片段插入 7000bp 载体

好评如潮，反复订购：

温馨提醒：除了Gibson无缝克隆，市场上也广泛流行各种价格低廉的同源重组mix，大多是由单一重组酶（外切酶）制成的，只负责把同源臂接上，质粒上的缺口是需要先转入感受态细胞，再利用细菌的内在体系 进行修复，遇到较大的缺口时，大概率会插入细菌的基因组片段，导致克隆失败！由于缺口的原因，转入细菌时的摩檫力会增大，导致转化效率降低，在一次性插入多个DNA片段的时候，表现的尤为明显。 而Gibson原理的Cloning Kit则不会出现这样的问题，在感受态体外已经完成了整个质粒的闭合环状的组装，表现出更出色的效率和稳定性！

国外N公司销售的Gibson组装是比较标准的，但价格实在太高，每做一次连接就要花费100RMB，Are you kIdding me？一个大实验室的试剂采购者都知道：what I am talking about！若是自己制备Gibson cloning mix，每个反应的原材料成本只要25RMB。而北京金百特生物，7年来，不断优化技术指标，性能业界领先，销量逐年上升，生产成本逐年下降，其生产的One Step Gibson Cloning Kit ,最低每个反应只要15.12元！

开学季（即日起-2025.4.30），还有买4赠1（同规格正品）的优惠哦！

咨询 / 购买，请联系 当地代理商 或 北京金百特生物