答疑解惑丨细菌内毒素检测常见问题解答第一弹！

在进行细菌内毒素检测的过程中，技术人员常面临各种挑战与疑问，为解决这些问题，科德角国际汇总了客户咨询的常见问题，并以详尽的问答形式提供了指导性的解答，为相关从业者提供参考。

一、如何溶解细菌内毒素标准品？

对于不同类型的细菌内毒素标准品，其溶解方法有所不同。

▶▶美国药典USP细菌内毒素标准品（USP-RSE）：加入5mL细菌内毒素检测用水（2000EU/mL），再剧烈涡旋30分钟。

▶▶科德角国际欧洲药典细菌内毒素参考标准品（BRP）：将5mL细菌内毒素检测用水添加到小瓶中。使用涡旋混合器间歇混合30分钟以复溶，以获得初始浓度2000EU/mL的储备溶液。

▶▶科德角国际ACC细菌内毒素工作标准品（CSE-E0005）：加入细菌内毒素检测用水使细菌内毒素初始浓度达到1000EU/mL（具体浓度参考试剂CoA），剧烈涡旋1分钟，静置5分钟，重复5次以充分溶解。

二、中国药典下的细菌内毒素标准品选择

在中国药典的规定下，进行细菌内毒素检测时应使用药典规定的细菌内毒素标准品，包括USP-RSE、EP-BRP、CSE以及中国食品药品检定研究院的细菌内毒素国家标准品。

三、凝胶法、浊度法、显色法的区别

凝胶法主要用于半定量分析，而显色法和浊度法则用于定量分析。

显色法和浊度法虽然大体相似，但在检测原理、检测波长、检测试剂、检测范围以及检测成本上均存在差异，因此在选择这两种方法之前，需要根据实际需求进行审慎而合理的考量。

当凝胶法、显色法和浊度法的检测结果出现疑问或争议时，应以凝胶法的结果作为最终的判定依据。

四、检测时必须使用检测专用耗材吗？

在进行细菌内毒素检测时，虽然不必使用专用的检测耗材，但必须使用不含细菌内毒素或β-葡聚糖的器具。

玻璃器具可通过超过250℃的干热灭菌30分钟以上来灭活细菌内毒素，同时需避免使用可能释放微量金属离子（如Fe、Al、Ga、Cr等）影响检测结果的金属器具。

此外，对于一次性塑料器具，除需获得生产商的保证外，还应确认其不受细菌内毒素污染、不吸附细菌内毒素，且洗脱物不含影响检测结果的物质。

五、胃肠道外给药细菌内毒素的限值确定

对于药典中未规定细菌内毒素限值的样品，其限值公式如下：

内毒素限值(EU/mL)=K值(EU/kg)/人最大给药量(mL/kg)

其中，K值根据给药途径的不同而有所差异。

频繁或连续注射时，人最大给药量为1小时内注射的最大剂量。

▶▶参考

日本、美国、欧洲药典规定的K值（致热细菌内毒素量）

六、如何计算MVD（最大有效稀释率）？

计算公式如下：

▶▶λ：凝胶法中表示鲎试剂的标示灵敏度，光度法中表示细菌内毒素标准曲线范围的最小浓度。

此外，科德角国际的PyrosKinetix®Flex细菌内毒素定量检测系统配套软件“PEXS”带有MVD自动计算功能，方便用户进行快速准确的计算。

七、不溶于水的样品检测？

对于不溶于水的样品，如果能溶于1%乙醇或1%DMSO，在进行检测时不会对鲎试剂造成影响。

八、样品保存方法？

保存样品时需注意以下几点：

●确保样品中无活菌繁殖；

●细菌内毒素值不会随保存期而发生变化；

●确保保存容器无细菌内毒素污染，无细菌内毒素吸附，不含影响检测结果的洗脱物。

九、如何调节样品的pH值？

如果样品溶液的pH值不在6.0～8.0范围内，则需要进行调节以确保检测准确性。细菌内毒素检测的最佳pH值约为7.3，但由于鲎试剂中含有缓冲成分，此该检测在pH6.0至8.0的范围内均可进行。

对于可稀释的样品，可通过稀释来调整pH值；对于不可稀释的样品，则可在样品溶液中加入稀NaOH或HCl溶液来调节pH值。

此外，也可利用缓冲液来稀释样品溶液。为确保调节效果，建议使用按需配制的NaOH或HCl溶液来调整pH值。

十、检测用试管可重复使用吗？

检测用试管不可重复使用。稀释或样品保存用试管可在进行250℃超过30分钟的干热灭菌后重复使用。