桑叶生物碱对高脂饮食诱导小鼠肝损伤的改善作用及机理

肝损伤可由药物副作用、过量饮酒、摄入环境中的某些有毒物质、长期高脂饮食等因素引起，是危害人类身体健康最常见的疾病之一。研究表明，高脂饮食会导致非酒精性脂肪肝，造成由单纯性脂肪肝转变为非酒精性脂肪肝炎，进一步演变成肝硬化甚至是肝癌。 近年来大量研究证明中药有治疗肝损伤的作用。 桑叶为药食同源，生物碱是桑叶的主要活性成分之一。 研究表明，桑叶生物碱具有降糖、降脂、抑制病毒活性、抗肿瘤细胞生长、减轻肾损伤等作用。

西南大学食品科学学院、重庆市农产品加工及贮藏重点实验室、食品科学与工程国家级实验教学示范中心的王祖文、杨忠敏和丁晓雯*等人采用高脂饮食建立小鼠肝损伤模型，以桑叶生物碱为研究对象，初步探讨桑叶生物碱改善高脂饮食小鼠肝损伤的作用与机理，为桑叶保护肝脏相关保健食品的开发提供理论依据，为桑叶产业发展提供新思路，为高脂饮食导致肝损伤的预防和治疗提供新的方向。

1. 桑叶生物碱对肝脏系数的影响

本研究测定了桑叶生物碱对高脂饮食小鼠肝脏系数的影响。结果显示，与正常对照组相比，喂饲4、8、12、16 周后，高脂对照组小鼠肝脏系数分别显著增加了10.67%、11.24 %、12.38%、7.58%（P＜0.05），提示高脂饮食可能会导致小鼠的肝脏损伤。与高脂对照组相比，除低剂量组在灌胃4 周时肝脏系数未下降外，其余时间各剂量组小鼠的肝脏系数均显著下降（P＜0.05），并于8 周末恢复到正常水平，与正常对照组比较无显著性差异（P＞0.05）。

2. 桑叶生物碱对高脂饮食小鼠ALT、AST活力的影响

本研究测定了各组小鼠血浆AST、ALT活力，以考察桑叶生物碱对高脂饮食小鼠肝损伤的影响。

桑叶生物碱对高脂饮食小鼠血浆AST活力的影响

结果显示，实验期间正常对照组小鼠血浆AST活力基本保持稳定。与正常对照组比，高脂对照组小鼠血浆AST活力显著升高（P＜0.05），且随着喂饲高脂饲料时间的延长，AST活力呈现递增趋势，在第4、8、12、16周，小鼠血浆AST活力分别增加了48.02%、53.44%、71.16%、82.06%，说明持续摄入高脂饮食会不断加重肝细胞损伤，破坏细胞膜，释放出大量AST。与高脂对照组比，随着桑叶生物碱灌胃剂量增加和灌胃时间延长，各剂量组的小鼠血浆AST活力均有所下降。灌胃至16 周末，低、中、高剂量组小鼠血浆AST活力分别下降了29.84%、42.02%、46.44%，中、高剂量组小鼠的AST活力恢复到正常水平，与正常对照组相比无显著差异（P＞0.05）。

桑叶生物碱对高脂饮食小鼠血浆ALT活力的影响

结果显示，实验期间正常对照组小鼠血浆ALT活力基本保持稳定。与同时期的正常对照组比，第4、8、12、16周末，高脂对照组小鼠血浆ALT活力分别增长了83.33%、57.12%、62.85%、70.41%（P＜0.05）。与高脂对照组比，随着桑叶生物碱灌胃剂量增加和时间延长，各剂量组小鼠血浆ALT活力均有所下降。从第12周末开始，中、高剂量桑叶生物碱灌胃的小鼠血浆ALT活力均恢复到正常水平，与正常对照组比差异不显著（P＞0.05）。

3. 桑叶生物碱对高脂饮食小鼠肝组织病理学的影响

为了研究桑叶生物碱对高脂饮食小鼠肝脏的影响，通过对各实验组小鼠肝脏染色、镜检，考察灌胃桑叶生物碱粗提取液4、8、12、16 周后对小鼠肝脏组织结构的影响，结果如下图所示。

由上图可知，实验期间正常对照组小鼠肝组织结构形态正常、质地均匀，肝细胞呈规则多边形，大小相似，胞质极丰富，细胞核清晰易见。随着高脂饲料喂饲时间的延长，高脂对照组小鼠肝组织胞浆内分布的脂滴逐渐增加，部分细胞核被脂滴挤压至胞浆边缘，周围可见弥漫性肝细胞脂肪变性，大量肝细胞明显肿胀。随着低、中剂量桑叶生物碱灌胃时间的延长，肝细胞的形态与排布逐渐趋于正常，肝组织胞浆内脂滴、肝细胞紊乱有所改善；而整个实验期间，当灌胃高剂量桑叶生物碱时，小鼠肝组织形态、大小基本恢复正常，脂肪的聚集现象不明显，细胞核的大小均较正常，肝细胞呈多边形，与正常对照组比无明显差异。

4. 桑叶生物碱对肝脏炎症因子mRNA表达的影响

本研究着重考察肝脏组织中TNF-α、IL-10mRNA表达情况，从而判断高脂饮食诱导肝脏损伤的炎症反应严重程度和桑叶生物碱是否具有抑制炎症的作用。

桑叶生物碱对肝组织TNF-αmRNA表达的影响

结果显示，实验期间正常对照组小鼠肝脏TNF-αmRNA表达水平基本保持稳定。与正常对照组比，高脂对照组小鼠肝脏TNF-αmRNA表达水平显著上升（P＜0.05），在4、8、12、16 周末分别增加了233.33%、225.60%、222.03%、217.09%，说明高脂饮食引起炎症反应，小鼠肝细胞中TNF-αmRNA表达水平增加，但与喂饲时间无明显关系。与高脂对照组比，随着桑叶生物碱灌胃时间的延长，各剂量组小鼠肝脏TNF-αmRNA表达量均呈现降低趋势；在16 周末，灌胃低、中、高剂量桑叶生物碱小鼠肝脏TNF-αmRNA表达量分别下降了47.41%、48.90%、68.56%，高剂量组小鼠的TNF-αmRNA表达量恢复至正常水平，与正常对照组相比无显著差异（P＞0.05）。

桑叶生物碱对肝组织IL-10mRNA表达的影响

结果显示，实验期间正常对照组小鼠肝脏 IL-10 mRNA表达量基本保持稳定。与正常对照组比，高脂对照组小鼠 IL-10 mRNA表达量显著降低（ P ＜0.05），随着喂饲时间的延长，表达量呈现下降趋势，4、8、12、16 周分别降低了26.49%、41.69%、42.34%、57.04%。与高脂对照组比，灌胃桑叶生物碱的各剂量组小鼠肝脏 IL-10 mRNA表达量随着时间延长逐渐上升；在16 周末，低、中、高剂量组小鼠肝脏 IL-10 mRNA表达量分别提高了70.64%、137.12%、155.30%；且中、高剂量组 IL-10 mRNA表达量恢复至正常水平，与正常对照组相比无显著差异（ P ＞0.05）。

5. 桑叶生物碱对小鼠肝脏细胞凋亡因子表达的影响

本研究考察桑叶生物碱对高脂饮食小鼠细胞凋亡因子Bax和Bcl-2mRNA表达量的影响。

桑叶生物碱对肝组织BaxmRNA表达的影响

结果显示，实验期间正常对照组小鼠肝组织BaxmRNA表达量基本保持稳定。与正常对照组比，高脂对照组小鼠的肝组织BaxmRNA表达量显著升高（P＜0.05），于4、8、12、16 周分别升高了216.00%、250.00%、217.39%、213.04%。与高脂对照组比，灌胃桑叶生物碱的各剂量组小鼠BaxmRNA表达量显著下降（P＜0.05），且随着喂饲时间延长逐渐下降；在16 周末，桑叶生物碱低、中、高剂量组小鼠肝脏BaxmRNA表达量分别下降了43.06%、51.39%、68.06%，高剂量组小鼠该指标恢复至正常水平，与正常对照组相比无显著差异（P＞0.05）。

桑叶生物碱对肝组织Bcl-2mRNA表达的影响

结果显示，实验期间正常对照组小鼠肝组织Bcl-2mRNA表达量基本保持稳定。与正常对照组比，高脂对照组Bcl-2mRNA表达量显著下降（P＜0.05），于4、8、12、16 周分别下降了44.64%、44.44%、50.00%、38.46%。与高脂对照组比，灌胃桑叶生物碱中、高剂量组小鼠Bcl-2 mRNA表达量在4 周末显著升高（P＜0.05）；而低剂量组小鼠Bcl-2 mRNA表达量在8 周末显著升高（P＜0.05）；12 周末，灌胃桑叶生物碱的低、中、高剂量组小鼠肝脏Bcl-2mRNA表达量分别上升了59.26%、77.78%、74.07%，均恢复至正常水平，与正常对照组相比无显著差异（P＞0.05）。

讨 论

本实验以高脂饮食小鼠为考察对象，研究桑叶生物碱对高脂饮食引起肝功能异常的改善作用。当肝细胞受损时，ALT、AST释放入血，浓度升高。研究发现，喂饲高脂饲料的同时灌胃桑叶生物碱，随着灌胃剂量的增加和灌胃时间的延长，桑叶生物碱能有效降低小鼠脏器系数，降低血浆中ALT、AST活力，维持肝功能正常，与肝脏病理切片结果一致。 本研究发现桑叶生物碱能下调高脂饮食小鼠的促炎因子TNF-αmRNA表达，上调抗炎因子IL-10mRNA表达，减少炎症反应。本研究发现灌胃桑叶生物碱可抑制高脂饮食小鼠肝细胞中促凋亡因子BaxmRNA表达，促进Bcl-2mRNA表达，减少细胞非正常凋亡。 综上认为，桑叶生物碱可改善高脂饮食诱导的小鼠肝损伤，其机制可能与降低炎症反应和抗肝细胞凋亡有关。该研究结果有助于高脂饮食诱导肝损伤的预防和治疗。

本文《桑叶生物碱对高脂饮食诱导小鼠肝损伤的改善作用及机理》来源于《食品科学》2019年40卷19期210-216页，作者：王祖文，杨忠敏，杨 敏，黄先智，丁晓雯。DOI:10.7506/spkx1002-6630-20180910-096。

为进一步促进动物源食品科学的发展，带动产业的技术创新，更好的保障人类身体健康和提高生活品质，北京食品科学研究院和中国食品杂志社在成功召开“2019年动物源食品科学与人类健康国际研讨会（宁波）”的基础上，将与青海大学农牧学院于2020年6月20-21日在西宁共同举办“2020年动物源食品科学与人类健康国际研讨会”。研讨会将就肉、水产、禽蛋、乳制品等动物源食品科学基础研究、现代化加工技术，贮藏、保鲜及运输，质量安全与检测技术，营养及风味成分分析，副产物综合利用，法律、法规及发展政策等方面的重大理论研究展开深入探讨，交流和借鉴国外经验，为广大食品科研工作者和生产者提供新的思路，指明发展方向。

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修改/编辑：袁月；责任编辑：张睿梅

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