流式圈门看似只是把散点图上的细胞群圈出来,但真正决定结果能不能用的,是对照设置、碎片排除、单细胞筛选、活细胞筛选和目标亚群分群有没有按顺序完成。
简单来说,FSC 主要反映细胞大小,SSC 主要反映细胞内部复杂度。先在 FSC/SSC 图上找到主细胞群,再一步步排除碎片、粘连体和死细胞,最后用 CD3、CD19 等特异标记读出 T 细胞、B 细胞比例。
只有把阴性边界、荧光补偿、非特异信号和异常事件都排干净,最后得到的亚群比例才真正有解释价值。
圈门不是「凭感觉画得像」,而是每一步都在上一步合格细胞里继续筛选。顺序对了,数据才稳,复测才不容易飘。
编辑:冷漠小 z
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