小活检组织病理制片全流程与关键要点

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小活检组织量少、珍贵、易损。制片过程中的每一步都至关重要，稍有疏忽就可能导致组织丢失、结构破坏、人为假象，直接影响诊断结果。

制片流程详解与注意事项

01

标本接收与核对

①收到标本后，立即核对申请单信息（姓名、部位、临床信息）与标本容器标签是否完全一致。

②检查固定液是否足量（体积至少为组织体积的10倍），是否完全浸没组织。

③记录接收时间、标本大小、形态特征（颜色、质地、数量）。

注意事项：

△严防差错：任何信息不符需立即与送检科室沟通确认。

△及时固定：收到后立即处理或确保已充分固定。延迟固定是组织自溶、抗原丢失的首要原因！

02

充分固定

①使用10%中性缓冲福尔马林（NBF）是金标准。

②固定时间：一般小活检（如胃镜、肠镜、穿刺）需6-24小时。过短固定不足，过长组织过硬影响切片。小组织块（<1mm）固定时间可缩短至4-6小时，但需确保穿透。

注意事项：

△固定液量：绝对保证足量（10:1）。

△避免挤压：组织放入容器时动作轻柔，避免镊子用力夹取造成挤压伤。可使用滤纸或海绵包裹微小组织。

△特殊标本：需特殊处理（如电镜、冷冻、分子检测）的标本，务必按规范分装，避免直接接触福尔马林。

03

脱水、透明、浸蜡

①使用全自动脱水机是首选，确保程序标准化。

②针对小活检组织，需优化程序：适当缩短高浓度酒精和二甲苯（或替代品）的处理时间，防止组织过度硬化、变脆。

③浸蜡温度和时间需精确控制，保证石蜡充分渗透。

注意事项：

△程序定制：强烈建议科室针对小活检（尤其是微小活检）设置专用的、更温和的脱水浸蜡程序。

△试剂状态：定期更换脱水透明试剂，避免试剂失效影响效果。

△避免高温：浸蜡温度不宜过高（通常60-65℃），时间不宜过长。

04

包埋（关键步骤！）

①使用合适的模具（小号或专用微小组织模具）。

②方向至关重要！必须确保最大切面或最有诊断价值的切面朝下（朝向刀片）。这需要经验判断和细致操作。

③动作迅速准确，避免蜡块凝固过程中组织移位。

④微小组织可集中包埋在同一蜡块中，但需清晰标记区分。

注意事项：

△方向！方向！方向！错误的包埋方向可能导致关键病变无法切到，是重大失误！

△防移位：镊子预热，操作轻柔精准。

△标识清晰：蜡块标签信息准确无误。

05

切片

①切片刀或一次性刀片必须锋利无缺口。

②充分冷却蜡块（冰盘或冷冻台）。

③薄切：小活检组织切片厚度通常要求3-4微米。过厚（>5μm）会掩盖细胞细节和结构。

④连续多切：对珍贵小活检（尤其怀疑淋巴瘤等），建议连续切取多张白片（10-20张或更多）备用（免疫组化、分子等）。

⑤水面展开：使用温水展片台（约45℃），动作轻柔，避免过度展片造成组织膨胀变形或裂隙。

注意事项：

△刀锋锋利：钝刀是产生划痕、颤痕、组织脱落的主要原因。

△防污染：切不同病例间彻底清洁刀架、镊子，防止交叉污染。

△防脱片：使用防脱载玻片（如APES或多聚赖氨酸玻片），特别是对骨、软骨、血块或脱钙组织。

6

染色 (HE) 与封片：

①标准化染色程序（自动染色机最佳），确保苏木精和伊红着色适中、对比清晰。

②分化、返蓝步骤精准控制。

③梯度酒精脱水彻底，二甲苯透明透彻。

④使用中性树胶封片，避免气泡，封片胶量适中，盖玻片大小合适。

注意事项：

△试剂质量：定期更换染色试剂，保证新鲜有效。

△脱水透明：脱水不彻底会导致切片发雾；透明不足影响封片透明度和长期保存。

△封片质量：避免胶量过多外溢或过少产生气泡、干涸。盖玻片下无灰尘。

小活检制片“黄金法则”

1.“快”字当头：及时固定，及时处理。

2.“细”致入微：核对仔细，操作轻柔，方向精准。

3.“足”量保障：固定液足量，试剂有效足量。

4.“优”化程序：脱水浸蜡程序温和化、定制化。

5.“锐”不可当：切片刀/刀片保持锋利。

6.“薄”显真章：坚持薄切（3-4μm）。

7.“防”患未然：防差错、防污染、防脱片、防假象。

8.“备”而无患：珍贵小活检务必预留白片。

高质量的切片是精准诊断的基石！让我们从每一个小活检做起，精益求精，为临床和患者提供最可靠的病理依据！

来源：湖北省中西医结合医院病理科

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