复方1区！华中科大同济医院揭示四物汤通过调节内质网应激信号改善卵巢早衰机制

【写在前面】：本期推荐的是由华中科技大学同济医学院同济医院中西医结合研究所、华中科技大学同济医学院同济医院中西医结合科等研究团队合作近期发表于Phytomedicine(IF8.3）的一篇文章，揭示四物汤通过调节内质网应激信号通路改善化疗引起的卵巢早衰。

【期刊简介】

【题目及作者信息】

Si-Wu-Tang ameliorates chemotherapy-induced premature ovarian insufficiency by regulating a signaling pathway in endoplasmic reticulum stress

背景

卵巢早衰（POI）是一种临床难治性生殖系统疾病。我们之前的研究表明，中药配方四物汤（SWT）可能通过改善卵巢血管生成来改善动物模型中的POI，但其潜在机制尚不清楚。

目的

探讨中药复方SWT对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）和POI动物模型的作用机制。通过研究其机制，本研究希望揭示中医“养血活血”的内涵。

方法

应用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱（UPLC-Q-TOF/MS）鉴定SWT中的化学成分。在细胞实验部分，使用4-氢过氧环磷酰胺（4-OOHCY）建立化疗诱导的HUVEC损伤模型。检测内质网应激（ERS）和细胞凋亡水平。应用激动剂和抑制剂来阐明SWT对ERS信号通路的调节作用。在动物实验部分，分别使用环磷酰胺（CY）建立大鼠和小鼠模型。通过监测发情周期，卵巢指数，组织病理学切片和性激素水平来评估建模和治疗效果。采用多种技术检测卵巢组织和局部微血管中的ER和凋亡水平。

结果

SWT增强HUVEC活力，降低化疗诱导的ER，氧化应激和凋亡水平。它还保护了HUVEC的迁移和管形成能力。潜在的机制涉及SWT下调由4-OOHCY触发的PERK/eIF2α/ATF4/CHOP信号通路的激活。在POI动物模型中，SWT通过改善ERS和细胞凋亡来恢复低体重，性激素水平，卵泡计数和卵巢血管生成。

结论

总之，SWT通过调节ERS中的PERK/eIF2α/ATF4/CHOP信号通路来保护HUVEC和POI动物模型的血管生成免受化疗诱导的损伤。

图文摘要

【前言】

卵巢早衰（POI）是一种以40岁以下女性月经不规律为特征的疾病。主要症状包括月经过少，血管舒缩不稳定，睡眠障碍，外阴阴道萎缩，性交困难和疲劳。最近的一项荟萃分析显示，全球POI患病率约为3.5%，发展中国家的女性患病率更高。

目前，POI可用的治疗选择非常有限，主要依靠外源性激素替代疗法（HRT）。虽然HRT可以缓解与雌激素缺乏相关的症状，并对低雌激素引起的全身并发症提供一定的预防作用，但它不能恢复卵巢储备。

四物汤（SWT）是一种治疗妇科疾病的经典中药配方，起源于“仙授理伤续断秘方”。经过千年的临床应用，SWT是一种成熟的补血、补血和调节血液循环的处方。在临床研究中，证明改良SWT与Climen联合治疗POI优于单独使用Climen。此外，另一项临床试验显示，SWT的煎剂和浓缩制剂均能促进卵泡发育不良患者的卵泡发育。我们之前的研究也证实，SWT通过增强促血管生成因子的分泌来改善POI小鼠的卵巢微环境，血管发育和妊娠结局。为了进一步阐明SWT在卵巢血管生成中的保护机制，有必要使用4-氢过氧环磷酰胺（4-OOHCY）建立体外化疗模型，4-氢过氧环磷酰胺是环磷酰胺（CY）的活化类似物。人脐静脉内皮细胞（HUVECs）是研究血管生成和内皮屏障功能等基本内皮细胞生物学的广泛接受和良好表征的模型。该用途已在许多研究中得到广泛验证，包括POI，多囊卵巢综合征，卵巢过度刺激综合征，子宫内膜异位症，因此我们选择HUVEC作为离体模型来探索血管生成特性并研究SWT对血管生成的贡献。随后，进行转录组分析以探索潜在的机制，然后在POI动物模型中进一步验证。

【结果部分】

1.SWT 的UPLC-Q-TOF/MS分析结果。

2.在人脐静脉内皮细胞（HUVECs）中建立化疗诱导损伤模型及形态与功能 SWT 的保存。

3.转录组学分析表明， SWT通过调节内质网中的蛋白质加工过程，对化疗损伤的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）具有保护作用。

4.SWT 对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）内质网应激（ERS）、氧化应激、细胞凋亡及增殖的影响。

5.SWT 调节了ERS及凋亡相关分子的基因表达水平。

6.SWT 下调了PERK/ eIF2α /ATF4/CHOP信号通路。

7.SWT 治疗改善了POI大鼠模型的卵巢功能。

8.SWT 治疗调控了POI大鼠ERS及凋亡相关标志物的基因表达。

9.SWT 治疗改善了POI大鼠ERS相关蛋白水平及卵巢细胞凋亡。

10.SWT 改善了POI动物模型中与血管内皮相关的血管生成、滤泡发育及CHOP表达。

11.组织透明化与成像验证表明， SWT 治疗可改善POI模型小鼠的血管生成及卵泡发育。

【结论与讨论】

SWT 通过调控PERK/ eIF2α /ATF4/CHOP信号通路，在抑制化疗损伤的同时，保护了人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的增殖与血管生成能力，并减少 HUVEC 凋亡。此外， SWT 能全面恢复卵巢损伤（POI）大鼠的生理特征，改善卵巢微环境中的内质网应激（ERS）。本研究为 SWT 作为POI基础治疗方案提供了更多实验证据，阐明并丰富了 SWT 在‘滋补血液、活血化瘀’方面的中医内涵。

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