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产品名称:6-CR6G Succinimidyl Ester的应用优势与实验设计
一、实验设计要点
标记条件优化:
反应体系:无水DMSO溶解染料,与生物分子(如抗体/蛋白质)在PBS缓冲液(pH 7.5-8.5)中反应,室温或37℃下1-2小时,需添加Pluronic F-127增强疏水性染料溶解性。
控制变量:避免金属离子(如Cu²⁺)干扰,严格除水除氧,防止副反应(如水解、自聚)。
纯化与质量控制:
纯化方法:透析、凝胶过滤或离子交换色谱去除未反应染料及副产物,HPLC/质谱验证标记效率及产物纯度(纯度≥95%)。
光谱验证:荧光光谱分析确认激发/发射波长,确保标记后信号稳定性。
应用场景设计:
流式细胞术:细胞表面标记、免疫分选及细胞周期分析,需优化标记浓度(如1-10 μM)及孵育时间。
显微镜成像:活细胞/固定细胞荧光标记,支持双光子显微镜高时空分辨率成像(如100-1000 fps记录钙振荡)。
蛋白质研究:免疫沉淀、Western blot中抗体标记,或构建荧光探针追踪蛋白质相互作用。
体内成像:标记药物载体/纳米颗粒,追踪肿瘤靶向递送及生物分布,需评估体内半衰期及代谢产物毒性。
注意事项:
储存与操作:严格避光、低温保存,避免反复冻融;操作时佩戴防护装备,废弃物按危险化学品规范处理。
异构体控制:注意5-CR6G与6-CR6G的位置异构体差异,选择合适异构体或纯化以避免生物活性差异。
二、挑战与解决方案
挑战:叠氮化物版本需注意爆炸性风险,铜催化点击化学残留毒性;复杂生物体系中异构体影响可重复性。
解决方案:采用无铜催化体系(如SPAAC反应)或添加螯合剂降低金属残留;通过HPLC纯化异构体,优化反应条件提升批次一致性。
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