Maleimide-PEG-NHS，马来酰亚胺-聚乙二醇-活性酯的反应活性验证

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产品名称：Maleimide-PEG-NHS，马来酰亚胺-聚乙二醇-活性酯的反应活性验证
一、马来酰亚胺基团（巯基反应）活性验证
模型分子选择与反应设计
巯基模型分子：半胱氨酸（Cys）、谷胱甘肽（GSH）、巯基乙醇等，通过迈克尔加成反应与马来酰亚胺形成稳定硫醚键。
反应条件：pH 6.5-7.5、室温、无金属离子环境，避免马来酰亚胺水解或副反应。
对照实验：设置无巯基对照组，验证反应特异性。
反应效率量化
紫外-可见光谱：监测马来酰亚胺特征吸收峰（约320 nm）的消失，计算反应速率常数。
荧光标记法：若马来酰亚胺偶联荧光分子（如罗丹明B），通过荧光强度变化定量偶联效率。
质谱（MS）：直接检测反应产物分子量，确认硫醚键形成。
特异性验证
竞争实验：加入过量巯基竞争剂（如DTT），观察反应抑制效果，验证马来酰亚胺对巯基的高选择性。
pH依赖性：测试不同pH下反应速率，确认中性条件最优性。
二、NHS酯基团（氨基反应）活性验证
模型分子选择与反应设计
氨基模型分子：甘氨酸、赖氨酸、氨基修饰的蛋白质（如BSA）、抗体片段等，通过酰胺化反应形成稳定酰胺键。
反应条件：pH 8.0-9.0、4℃或室温，避免NHS酯水解（半衰期约数小时）。
对照实验：设置无氨基对照组，验证反应特异性。
反应效率量化
荧光胺法：利用荧光胺与游离氨基反应生成强荧光产物，间接测定氨基消耗量，计算偶联效率。
质谱（MS）：检测产物分子量，确认酰胺键形成。
SDS-PAGE/Western blot：对蛋白质偶联产物进行电泳分析，通过条带迁移率变化验证偶联成功。
水解稳定性验证
时间依赖性实验：监测不同时间点NHS酯水解程度（如通过释放的NHS荧光标记物），确定最佳反应时间窗口。
缓冲液成分影响：测试不同缓冲液（如PBS、HEPES）对NHS酯稳定性的影响，优化反应体系。

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