步步为营：IP/Co-IP实验标准化操作流程指南

一个成功的IP/Co-IP实验，依赖于环环相扣的标准化操作。本文将梳理从样本准备到结果分析的全流程关键步骤与要点，助您建立稳健的实验体系。

第一步：样本制备与裂解使用非变性裂解液制备细胞或组织蛋白提取物，以保持蛋白质的天然构象和相互作用。裂解过程需在冰上操作，并加入蛋白酶抑制剂防止蛋白降解。裂解后，务必高速离心（如12,000-14,000 g，15分钟，4℃）以去除不溶性杂质，取上清用于后续实验。

第二步：抗体-磁珠复合物的制备与孵育

1. 磁珠预处理：取适量Protein A/G磁珠，用预冷的裂解缓冲液或PBS洗涤2-3次，充分重悬以去除储存液。
2. 抗体孵育：将特异性IP抗体或阴性对照IgG与预处理好的磁珠在4℃下轻柔旋转孵育30分钟至1小时，使抗体与磁珠结合。
3. 洗涤：用裂解缓冲液洗涤抗体-磁珠复合物2-3次，去除未结合的抗体。

第三步：免疫沉淀反应将洗涤后的抗体-磁珠复合物与准备好的蛋白样本在4℃下轻柔旋转孵育过夜（或根据抗体说明书建议的时间），使靶蛋白及其互作蛋白被特异性捕获。

第四步：洗涤与洗脱

1. 洗涤：这是降低背景的关键。使用预冷的裂解缓冲液（可含不同浓度的盐，如150-500 mM NaCl）洗涤磁珠-抗原-抗体复合物3-5次，每次洗涤需充分重悬磁珠。
2. 洗脱：根据下游应用选择洗脱方式。
   • WB分析：通常加入适量1×SDS-PAGE上样缓冲液，95-100℃加热5-10分钟进行变性洗脱。
   • 质谱或功能分析：可使用低pH甘氨酸缓冲液或竞争性多肽进行非变性洗脱，以保持蛋白活性。

第五步：下游检测与分析洗脱产物可直接用于SDS-PAGE电泳和Western Blot分析。务必同时上样Input（总蛋白裂解液）IgG阴性对照的样品，以正确解读结果。

亚科因生物（ABBKINE）通用型免疫（共）沉淀工具箱，正是为简化这一复杂流程而生。该工具箱提供了从非变性裂解液、蛋白酶抑制剂、预平衡好的磁珠、同型IgG阴性对照，到变性/非变性洗脱液的全套组分。

研究者无需再为繁琐的试剂配制和优化分心，只需按流程操作，即可获得高质量的IP产物。ABBKINE通过这种“化繁为简”的产品理念，将实验流程标准化，显著提升了实验的可重复性和效率，让研究者能更专注于科学问题的探索本身。