近日,山西农业大学农学院在Plant Biotechnology Journal上发表题为“CRISPR/Cas9-Mediated Base Editing of SiGS1 Confers Glufosinate Resistance in Foxtail Millet (Setaria italica)”的研究成果。农学院2023级硕士研究生陈嘉怡为文章第一作者,农学院谷子产业化技术创新团队王家刚教授、王宏智老师和原向阳教授(团队首席)为文章的共同通讯作者。
该研究通过腺嘌呤碱基编辑器(ABE8e)对SiGS1基因进行精确编辑,成功产生了S59G-T60A(SGTA)突变,同时编辑植株对草铵膦表现出稳定的抗性。
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通过对SiGS1的碱基编辑培育出抗草铵膦的谷子品种
该研究系统鉴定了谷子中的SiGS基因家族,共鉴定出五个SiGS基因成员,其中SiGS1与水稻OsGS1具有最高的序列同源性,提示其在功能上可能具有保守性。qRT-PCR分析显示,SiGS1在各组织中的表达水平较为均衡。亚细胞定位实验进一步证实该蛋白定位于细胞质,与其作为谷氨酰胺合成酶的功能定位一致。为探索其在草铵膦抗性中的潜在应用价值,研究团队构建了SiGS1过表达系与敲除系,然而植株对草铵膦的耐受性提升有限,未能实现显著抗性改良。基于自然界中已报道的抗性突变(如牛筋草中S59G突变)可有效降低草铵膦与靶标酶结合能力的机制,本研究采用精准基因编辑策略,旨在通过编辑SiGS1基因本身以实现功能优化。利用高效腺嘌呤碱基编辑器ABE8e,成功实现了对SiGS1基因的定点编辑,获得携带S59G-T60A(简称SGTA)突变的纯合植株。经草铵膦处理后,编辑植株表现出稳定且显著的抗性表型。生理分析结果表明,相较于野生型,抗性植株中谷氨酰胺合成酶(GS)活性显著提高,多种抗氧化酶(SOD、POD、CAT)活性亦明显增强,有效缓解了草铵膦诱导的氧化损伤;同时,光合色素含量得以较好维持,叶片生理状态更为稳健。尤为关键的是,SiGS1-SGTA纯合植株在生长发育过程中未出现明显抑制,主要农艺性状与野生型相比基本一致,仅千粒重略有下降,表明该精准编辑策略在赋予强抗性的同时,最大程度保留了植株正常的生长性能和产量潜力。
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