菌种「传代次数」必须在5代以内，是经验还是行标！

1、什么是菌种传代

简单说就是把菌种从旧培养基转移到新环境繁殖。但每传一代，菌的“血统”就可能偷偷改变！

2、 “5代”是经验值还是理论值？

《中国药典》2025版（四部）9203药品微生物实验室质量管理指导原则工作菌株的传代次数应严格控制，不得超过5代（从菌种保藏机构获得的标准菌株为第0代），以防止过度的传代增加菌种变异的风险。1代是指将活的培养物接种到微生物生长的新鲜培养基中培养，任何形式的转种均被认为是传代1次。必要时，实验室应对工作菌株的特性和纯度进行确认。

GB 15979-2024 《一次性使用卫生用品卫生要求》，新版标准替代老版本标准GB 15979-2002，已于2025年7月1日正式实施。在抑/杀菌试验中新版标准把试验菌株的代次从旧版方法的第3～14代更改为第3～6代，使一次性使用卫生用品所使用的阳性菌株代次更加接近我们常说的“传代次数不超过5代”的这个理论值。

GB/T 27405-2008实验室质量控制规范 食品微生物检测5.5.2.4所有的标准培养物从储备菌株传代培养次数不得超过5次，除非标准方法中要求并规定，或实验室能够提供文件化证据证明其相关特性没有改变。

3、5代以上行不行？

传代次数越多变异率越高，并没人说5代以上的菌种就不能使用，而是，越容易出现问题。如果5代以上菌种形态结构、生理生化性状等均未发生变化，还是可以使用的。但在实验过程中，并不建议过多传代。

所以，0代是人为划定的起点，只能是认可的保藏机构的菌种。可以说0代是一块金字招牌，代表对保藏机构品质的认可。

4、菌种保藏步骤

① 挑选特征典型的纯菌菌落；

② 确定保藏的合适菌体形态；

③ 选择最适宜的保藏方法；

④ 定期对保藏菌种进行检查，观察是否发生变化，若有变化，须改变保藏方法。保藏期满应及时进行移种。

5、菌种传代方法

①、斜面传代法‌‌

适用于细菌、酵母菌等生长较快的微生物。

②、液体传代法‌‌

适用于细菌、放线菌等在液体培养基中生长良好的微生物。

‌③、穿刺传代法‌‌

常用于细菌、酵母菌等，尤其适用于保存一些厌氧菌或半厌氧菌。

6、菌种保存方法

斜面低温保存法‌‌

原理‌：将菌种接种在适宜的斜面培养基上，待菌种生长良好后，置于4℃冰箱中保存。低温可以降低菌种的代谢活动，延长其存活时间。‌

适用菌种‌：适用于大多数细菌、酵母菌和霉菌。‌

甘油管保存法‌‌

原理‌：将菌种与无菌甘油溶液混合，使甘油终浓度达到15%-30%，然后置于-20℃或-80℃冰箱中保存。甘油可以降低冰点，减少冰晶对菌种细胞的损伤。‌

适用菌种‌：适用于各种细菌、酵母菌和部分放线菌。‌保存期限‌：在-20℃下可保存1-2年，在-80℃下可保存数年。‌

冷冻干燥保存法‌‌

原理‌：将菌种悬浮在含有保护剂的溶液中，快速冷冻后在真空条件下使水分升华，从而得到干燥的菌种制品。冷冻干燥可以最大程度地减少菌种细胞内的水分，降低细胞的代谢活动，延长菌种的保存时间。‌

适用菌种‌：适用于大多数微生物，尤其是对冷冻和干燥较为敏感的菌种。‌

液氮超低温保存法‌‌

原理‌：将菌种悬浮在含有冷冻保护剂的溶液中，直接投入液氮（-196℃）中保存。超低温可以使菌种的代谢活动几乎完全停止，从而长期保持菌种的活性。‌

适用菌种‌：适用于各种微生物，尤其是难以保存的菌种。‌

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