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Hoechst 33342,赫斯特荧光染料 33342的荧光特性与成像优势

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产品名称:Hoechst 33342,赫斯特荧光染料 33342的荧光特性与成像优势
1. 结构与化学特性
化学结构:分子式为C₂₇H₂₈N₆O·3HCl·3H₂O(无水分子量561.93),CAS号23491-52-3。其核心为苯并咪唑衍生物,通过非共价结合方式与DNA双链中富含A/T碱基对的小沟区域结合,形成稳定复合物。
溶解性:可溶于DMSO(20 mM)、水(100 mM),常配制成溶液分装储存。
稳定性:对酸、碱及酶解有一定抗性,但需避光、低温保存以防止氧化降解。
2. 荧光特性与成像优势
激发/发射波长:未结合DNA时激发波长346-350 nm,发射波长460 nm;与DNA结合后激发波长350 nm,发射波长461 nm,呈现明亮的蓝色荧光。
光稳定性:抗光漂白能力强,适合长时间观察及共聚焦显微镜成像。
定量能力:荧光强度与DNA含量成正比,可用于细胞周期分析(G1/S/G2期DNA倍体检测)、核体积测量及凋亡核浓缩程度评估。
pH敏感性:荧光强度随pH升高而增强,需控制实验条件以避免干扰。
3. 核心应用场景
细胞核染色与形态学分析:广泛用于活细胞或固定细胞的细胞核标记,结合荧光显微镜观察核形态(如凋亡核碎裂、核仁分布)或流式细胞术定量DNA含量。
细胞凋亡检测:凋亡细胞因膜通透性增加及DNA结构变化(如染色质浓缩),Hoechst 33342荧光强度显著高于正常细胞,可与PI/7-AAD联用区分活细胞(低蓝/低红)、凋亡细胞(高蓝/低红)及坏死细胞(低蓝/高红)。
细胞周期分析:通过流式细胞术检测DNA含量,划分G1(2n)、S(2n-4n)、G2/M(4n)期,评估细胞增殖状态。
多色荧光分析:与FITC、PE、APC等荧光探针联用,实现免疫表型(如CD3+ T细胞)、细胞周期及凋亡状态的同步检测。
干细胞与神经科学研究:用于监测干细胞分裂间期动态、神经元电活动与细胞周期关联,及肿瘤细胞倍体分析。
4. 操作规范与注意事项
浓度与孵育:活细胞染色推荐5-10 μM,固定细胞可提高至10-20 μM;37℃孵育10-30分钟,避免高浓度(>20 μM)导致荧光饱和。
洗涤与封片:染色后需用PBS/TBST洗涤2-3次,去除未结合染料;使用抗荧光淬灭封片液延长观察时间。
安全防护:对人体有刺激性,操作时需戴手套、护目镜,避免直接接触;废弃物按生物安全规范处理。
仪器设置:流式细胞术采用紫外激光(355 nm)激发,450 nm带通滤光片收集信号;荧光显微镜需配备UV激发滤光片组(如BP330-385 nm)。




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