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产品名称:AF594 Ethyl NHS Ester的核心应用场景
化学本质与结构特性
分子组成:分子式为C₅₁H₆₇N₅O₁₃S₂,分子量约1022.23,属于Alexa Fluor 594系列染料衍生物。核心结构为磺化罗丹明衍生物,含乙基修饰的NHS酯基团(-NHS-Ethyl),可与生物分子(如蛋白质、抗体、多肽)的伯胺(-NH₂)共价结合,形成稳定酰胺键。
光谱特性:激发波长约590 nm,发射波长约617 nm,呈现橙红色荧光,量子产率高达0.77,光稳定性良好,pH耐受范围广(4-10),适合生理环境应用。
核心应用场景
生物标记:广泛用于蛋白质、抗体、寡核苷酸(如5'-氨基修饰引物)的荧光标记,适用于免疫荧光(IF)、流式细胞术(FACS)、共聚焦显微镜、超分辨成像(如dSTORM、STED)及荧光原位杂交(FISH)。
多色成像:与FITC、Alexa Fluor 488、Cy5等染料兼容,支持多通道荧光检测,通道间串扰低。
探针开发:构建荧光探针、纳米颗粒标记及表面功能化(如固相载体、纳米材料)。
合成与反应机制
反应条件:NHS酯在pH 7.5-8.5(碳酸氢钠/硼酸盐缓冲液)下与伯胺高效偶联,反应时间30分钟至2小时,室温避光进行。
纯化方法:通过凝胶过滤(如Sephadex G-25)、透析或亲和层析去除游离染料,确保标记效率(理想标记率3-8个染料/蛋白)。
合成优化:乙基修饰提升在有机溶剂中的溶解性,减少水解风险;需避免含伯胺缓冲液(如Tris)干扰反应。
物理化学性质
溶解性:溶于DMSO、DMF、乙腈等有机溶剂,水溶性良好,磺酸基团减少生物分子聚集。
稳定性:-20℃避光保存,避免反复冻融;溶解后需立即使用,防止NHS酯水解(半衰期约15分钟,pH 7.4)。
光稳定性:长时间激光照射下信号维持强,优于传统染料,适合长时间成像。
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