如何追溯细胞房微生物污染的源头？

追溯细胞房微生物污染源头的核心是 “按‘污染传播路径’逆向排查”，从直接接触的样本 / 试剂，到操作过程，再到环境设备，层层缩小范围。

核心排查逻辑

1. 优先排查 “直接接触源”（细胞、试剂、耗材），这是污染最主要的传播途径。

2. 再排查 “操作过程”（人为失误、交叉污染），排除流程性问题。

3. 最后排查 “环境设备”（空气、培养箱、安全柜），确认是否为持续性污染源头。

具体追溯步骤

1. 直接接触源排查（优先级最高）

• 细胞样本：对同批次在养细胞进行全面检测，区分是单一细胞系污染还是多细胞系污染。单一细胞系污染可能是该细胞本身携带（如支原体）或操作时单独污染；多细胞系污染更可能是试剂、耗材或环境问题。

• 试剂耗材：

• • 取同批次未使用的培养基、血清、胰酶等，接种到无血清培养基或 LB 培养基中，37℃培养 48-72 小时，观察是否浑浊或出现菌落（判断试剂是否本身污染）。

  • 检查耗材包装是否破损、灭菌标识是否完整，排查高压灭菌不彻底或无菌包装失效的情况。

• 辅助材料：排查 PBS、胰酶、抗生素等辅助试剂，同样通过无菌培养检测是否污染。

2. 操作过程排查

• 交叉污染排查：回顾污染发生前的操作，是否有不同细胞系共用耗材（如未更换移液管）、污染样本与正常样本同时操作且距离过近等情况。

• 违规操作排查：确认是否存在 “非安全柜内开盖、手套接触非无菌物品后未更换、操作时交谈 / 咳嗽” 等行为，或新人操作不熟练导致的流程疏漏。

• 人员携带排查：若为真菌、皮肤相关细菌污染，可排查操作人员是否未按规范穿戴无菌服、口罩，或手套破损未及时更换。

3. 环境与设备排查

• 设备状态检测：

• • 生物安全柜：检查高效过滤器（HEPA）是否泄漏（可通过粒子计数器检测）、风机风速是否达标，若过滤器失效会导致空气污染物进入操作区域。

  • 培养箱：检查密封性（门封条是否老化）、内部是否积水（霉菌易滋生），检测 CO2 浓度是否稳定（浓度异常可能间接导致细胞抵抗力下降，易污染）。

  • 紫外灯：检测紫外强度（低于 70μW/cm² 需更换），确认消毒时间是否足够（是否存在未开紫外或消毒时间不足的情况）。

• 环境采样检测：

• • 对细胞房空气、实验台面、地面、门把手等进行表面涂抹采样，或沉降菌培养（培养 48 小时），判断环境是否存在持续性污染。

  • 若为支原体污染，可对细胞房空气、设备表面进行支原体专项检测（使用支原体检测试剂盒）。

4. 污染类型辅助定位

• 细菌污染（培养液快速浑浊、发黄）：多源于试剂污染、操作不规范或耗材灭菌不彻底。

• 真菌污染（出现白色 / 绿色菌丝、培养液缓慢浑浊）：多源于环境潮湿（如培养箱积水）、操作人员携带或空气传播。

• 支原体污染（细胞生长缓慢、形态异常，培养液无明显变化）：多源于血清、细胞系本身携带，或长期未更换的试剂、设备残留。

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