Sulfo-CY7-DBCO，磺化CY7-二苯环辛炔的合成方法

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产品名称：Sulfo-CY7-DBCO，磺化CY7-二苯环辛炔的合成方法
合成方法
主流合成路线
Sulfo-CY7的活化：
羧基活化：将Sulfo-CY7-COOH（100 mg）溶于无水DMF（5 mL），加入N-羟基琥珀酰亚胺（NHS, 20 mg）和1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺（EDC, 30 mg），室温搅拌2小时，生成Sulfo-CY7-NHS酯。
纯化：通过硅胶柱层析（洗脱剂：氯仿:甲醇=10:1）去除未反应的NHS和EDC，收集目标产物峰。
DBCO的修饰：
氨基化DBCO：将DBCO-NH₂（50 mg）溶于PBS（pH 7.4, 5 mL），直接用于下一步反应。
羧基化DBCO：若DBCO含羧基（-COOH），需先通过EDC/NHS活化羧基，生成DBCO-NHS酯。
Sulfo-CY7-DBCO的偶联：
反应条件：将Sulfo-CY7-NHS酯（50 mg）溶于PBS（pH 7.4, 5 mL），加入DBCO-NH₂（20 mg），室温搅拌12小时。
摩尔比：Sulfo-CY7-NHS酯:DBCO-NH₂=1:1-5:1（根据所需标记度调整）。
纯化：
透析：用截留分子量3 kDa的透析袋去除未反应的小分子杂质。
高效液相色谱（HPLC）：进一步纯化，收集目标产物峰（Sulfo-CY7-DBCO的保留时间早于未反应的Sulfo-CY7-NHS酯）。
表征：
质谱（MS）：确认分子量（Sulfo-CY7-DBCO理论分子量≈1000-1200 Da，具体取决于连接臂结构）。
薄层色谱（TLC）：以氯仿:甲醇=5:1为展开剂，Sulfo-CY7-DBCO的Rf值（0.3-0.5）低于未反应的Sulfo-CY7-NHS酯（Rf≈0.7）。
紫外-可见光谱（UV-Vis）：Sulfo-CY7特征吸收峰（λ_max=750 nm），DBCO无显著吸收峰。
荧光光谱：激发波长750 nm，发射波长775 nm，验证荧光活性。

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