梅毒水平旋转仪简介
荧光螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS)
原理
FTA-ABS试验以完整形态的梅毒螺旋体Nichol株作为抗原,加上经吸收剂(用梅毒螺旋体Reiter株制备而成)处理过的患者血清形成抗原抗体复合物,再加异硫氰酸荧光素标记的抗人免疫球蛋白,与血清梅毒螺旋体抗体结合。在荧光显微镜下,螺旋体显示苹果绿色的荧光,即为阳性反应。
材料
具体材料如下:
a) 梅毒螺旋体抗原玻片,有直径 0.5 cm 涂布梅毒螺旋体的圆圈,在高倍镜下每视野不少于 30条螺旋体,丙酮固定;
b) 吸收剂(5 mL 冷冻干燥品),由体外培养的 Reiter 株螺旋体制备而成,使用前用无菌蒸馏水恢复原体积;
c) 荧光抗体,用荧光素标记羊或鼠抗人免疫球蛋白;
d) 血清稀释板。
方法
具体方法如下:
a) 将血清标本于 56℃灭活 30 min,备用;
b) 吸收剂加入 5 mL 无菌蒸馏水,用作血清的稀释;
c) 血清标本和吸收剂按 1:5~1:20 稀释,混匀后置有盖湿盒内于 35℃~37℃孵育 30 min;
d) 将系列稀释的血清分别加到抗原片上(每孔不少于 30μL),放入有盖湿盒内,置 35℃~37℃孵育 30 min;
e) 用 0.01mol/L 的 PBS 冲洗抗原片,用磁力搅拌器低速以 0.01mol/L PBS 溶液洗涤抗原片,每 5 min 更换 PBS 液 1 次,共 3 次,最后一次用蒸馏水冲洗一遍,冷风吹干备用;
f) 抗原片每个圈内加 30μL 荧光抗体(荧光抗体稀释为工作液),放湿盒 35℃~37℃孵育 30min;重复步骤 e 的洗涤和吹干;
g) 抗原片加固封剂(甘油缓冲液)1 滴,覆以盖玻片,在荧光显微镜下观察;
h) 试验对照:每批次试验包括下列对照:
——4+阳性血清和 1+阳性血清对照,血清用 PBS 液和吸收剂分别按 1:5~1:20 稀释;
——非特异血清对照;
——染色对照:用 0.01 mol/L PBS 和吸收剂分别替代荧光抗体。
结果判读及报告
与不同阳性强度的对照血清相比,荧光显微镜下梅毒螺旋体的荧光强度等于或强于1+对照血清,判断和报告为阳性结果;无荧光判断为阴性结果;有微弱荧光但弱于1+对照血清判断为临界反应,需重复试验或用其他梅毒螺旋体血清学试验证实。
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