使用 VisiSens TD 和 荧光法残氧仪 监测 96 孔板中的耗氧量

通过呼吸测量测试植物种子的活力

使用 VisiSens TD 和 ViviPlate（新开发的气密板夹系统）监测 96 孔板中的耗氧量

PreSens残氧仪

PreSens开发了传感器和夹具工具ViviPlate，可以创建微量滴定板格式的不同数量和体积的封闭式呼吸器室。然后，可以使用我们的成像系统VisiSens从上方并行读取这些腔室。所有腔室都用可重复使用的传感器覆盖，并配有透明传感器板，一步关闭。密封板和盖板在孔/小瓶和传感器位置带有孔，允许从上方光学访问荧光光学氧传感器。三明治用滚花螺钉挤压，将反板压在盖板上，确保每个孔/小瓶的气密密封。

ViviPlate通过监测微生物、组织或细胞的耗氧能量代谢，允许对多个样品进行Vi能力和Vi性测试。为此，ViviPlate 评估耗氧率 （OCR）。通过添加我们的 CO2传感器ViviPlate将很快推出产品版本，可以确定呼吸商（O2吸收 / CO2释放）。

在下面的应用中，我们展示了如何使用此工具在四种不同植物物种的 96 个样品中进行植物种子活力测试。在萌发过程中，植物种子消耗氧气，种子呼吸作用可用作生存能力的指标。在我们的实验中，我们使用了新的传感器和夹具系统ViviPlate，它可以测量96孔板顶部空间中的氧气。将四种不同物种的植物种子置于96孔板中，每个孔一个。光学氧传感器位于每个孔的顶部，夹紧系统确保板和每个孔被密封。氧传感器是用VisiSens TD系统读出的，该系统允许在一张图像中记录每个孔中的所有96个氧传感器，并记录发芽过程中呼吸引起的氧气随时间推移而减少。然后，VisiSens ScientifiCal软件允许在一个屏幕上显示所有样品的耗氧量。

材料与方法

标准 96 孔板的每个孔都充满 100 μL 1% Phytagel™ （Sigma-Aldrich®）。在四个部分，每个部分 24 个孔中，每个孔中放置了四种不同植物物种的一粒种子（生菜、豆瓣菜、玉米沙拉和白甘蓝，Sperli GmbH;图 3）。使用带有 96 个孔的密封件和带有连接和预定位氧传感器点的透明板（SF-RPSu4、PreSens）关闭微量滴定板的所有孔。带有密封和传感器盖的 96 孔板被放置在一个专门设计的夹具（ViviPlate、PreSens）中，该夹具可以用滚花螺钉固定，并确保孔的气密密封。上部夹板在孔上方的位置有孔，因此可以从上方读取氧传感器。荧光光学O2使用 VisiSens TD 成像系统 （PreSens） 在 3 天内以 30 分钟的间隔读取传感器。使用VisiSens ScientifiCal软件（PreSens）对氧气记录进行可视化和分析。

植物种子活力

图 4 显示了 2 天后 96 孔板中的氧气测量值。在顶部，每个孔中的氧气浓度以颜色表示。色标设置在0到120%的空气饱和度之间，如右图所示。在一些井中，氧气浓度仍高于70%的空气饱和度，表明与其他井中的种子相比，内部的种子开始发芽的时间较晚，其中O2浓度已经下降到空气饱和度的10-20%之间。该软件允许将某些孔组合在一起并分析平均 O2集中在这些井中。我们选择了 24 个有生菜种子（深蓝色矩形）的孔和 24 个有白菜种子（红色矩形）的孔，并将它们分为两组。这两组中平均氧浓度的时间过程在下面的累积数据图中以各自的组颜色显示。对于两个物种的种子，平均 O2实验开始后不久，浓度开始下降。在最初的几个小时内，氧气下降较慢，但是当所有孔中发芽时，平均 O2注意力下降得更快。图5显示了所有孔中的起始氧浓度和最终氧浓度。所有种子都发芽并消耗了井顶空间中的氧气。在大多数孔中，氧气在实验结束时已经完全消耗（0%空气饱和）。

结论

借助ViviPlate夹具和VisiSens TD氧成像系统，我们能够同时评估96个样品的植物种子活力。该系统提供有关 96 孔微量滴定板每个孔中的氧含量的信息，并且可以轻松识别未发芽的种子。ViviPlate夹具可牢固地密封孔，因此可以进行精确的呼吸测量。该系统是并行监测大量样品氧的理想工具